论文部分内容阅读
目的观察在高糖环境下不同浓度的全长脂联素(f-APN)对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响；探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路以及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活化在f-APN诱导结肠癌细胞凋亡过程中的作用。方法应用不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml）的全长脂联素（f-APN）干预在高糖培养基（葡萄糖含量为4.5g/L的DEME培养基）中培养的结肠癌细胞株SW48024h、48h，分为高糖不加f-APN（APN0组）、高糖+10μg/ml f-APN组（APN10组）、高糖+20μg/ml f-APN组（APN20组）、高糖+30μg/ml f-APN组（APN30组）以及高糖+30μg/ml f-APN+p38MAPK阻滞剂SB203580(10μmol/L)组（APN30+SB组)，同时采用低糖培养基（葡萄糖含量为1.0g/L的DEME培养基）培养SW480细胞作为对照组（NC组）。分别应用MTT法以及流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡率；应用Western blot检测活性p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达情况。结果(1) f-APN干预SW480细胞24h后， APN30组细胞吸光度值(OD值)较APN0组、APN10组、APN20组均显著降低（P＜0.05)；干预48h后，APN10组、APN20组以及APN30组OD值均较APN0组显著降低（P＜0.01~0.05)，且APN10组、APN20组、APN30组三组间OD值逐渐降低（P＜0.05)。(2) f-APN干预SW480细胞24h后，APN0、APN10组、APN20组、APN30组细胞凋亡率分别为：3.89%、4.94%、7.43%、8.67%；干预48h后，上述四组细胞凋亡率分别为3.96%、6.21%、8.86%、9.47%。其中，24小时后APN30组细胞凋亡率显著高于APN0、APN10组、APN20组（P＜0.05）；48h后APN10组、APN20组、APN30组细胞凋亡率显著高于APN0组（P＜0.05~0.01），且APN10组、APN20组、APN30组三组间细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.05)。(3)Western-blot结果显示：与APN0组比较，APN20组、APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达均显著增高(P<0.01)；与APN20组相比，APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著增高(P<0.05)；与APN30组相比，APN30+SB组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论(1)高糖环境下，f-APN可抑制结肠癌细胞株SW480细胞的增殖，诱导其凋亡，这种效应呈浓度和时间依赖关系；(2)高糖环境下，f-APN促凋亡效应可能与脂联素通过激活p38MAPK通路，活化Caspase-3有关。