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根据GenBank中公布的结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因序列设计相应的引物,以H37Rv菌株的总DNA为模板,分别扩增获得fbpA(Ag85A)、fbpB(Ag85B)、 mpt64 (MPT64)、ppe57 (Rv3425)、esxB(CFP10)、hspX (16 KD) 和 pstS1 (38 KD)等七个目的基因。将纯化后的fbpA、fbpB、mpt64、ppe57 和 esxB基因片段同pMD18-T载体连接,测序正确后,克隆入pET30a表达载体,经PCR扩增和双酶切鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)构建原核表达重组菌。IPTG诱导表达BL21 (DE3)重组菌后,SDA-PAGE鉴定重组蛋白的表达,结果显示：Ag85B和CFP10为可溶性蛋白;Ag85A、MPT64和Rv3425主要为包涵体。以纯化后的hspX和pstS1基因片段为模板,利用over-lap PCR扩增获得hspX-pstS1融合基因,克隆入pMD18-T载体,测序正确后,同pET30a表达载体连接,经PCR和双酶切鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),构建原核表达重组菌。IPTG诱导表达BL21 (DE3)重组菌后,SDS-PAGE电泳结果显示16KD-38KD融合蛋白主要以包涵体的形式进行表达。超声破菌后,利用镍离子亲和层析柱纯化带有His标签的重组蛋白。将纯化后的以包涵体形式进行表达的重组蛋白置于透析袋内,用4M尿素、2M尿素和PBS溶液梯度洗脱复性蛋白。分别以复性后的Ag85A 和 16KD-38 KD重组蛋白做为血清学检测抗原包被酶标板,利用间接ELISA法对427份结核阳性血清和356份结核阴性血清进行检测,实验结果显示：抗原Ag85A共测出72份结核阳性血清,188份结核阴性血清,其敏感性为16.86%,特异性为52.81%,准确性为33.21%；抗原16 KD-38KD共测出394份结核阳性血清,315份结核阴性血清,其敏感性为92.27%,特异性为88.48%,准确性为90.55%。本研究成功构建了MTB六种特异性抗原的原核表达重组质粒,其开放阅读框正确、无突变,重组蛋白可以进行大量表达。ELISA实验结果显示16 KD-38 KD具有较高的特异性和敏感性,可以作为结核病抗体检测的候选抗原。