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放线菌素D是RNA合成抑制剂,具较强的诱导细胞凋亡的能力,实验证明放线菌素D可诱导Sf-9细胞,人白血病细胞株K562,肺泡巨噬细胞,CTLL-2和Jurkat细胞等凋亡。本实验用来放线菌素D诱导昆虫细胞Sl-1细胞凋亡。以终浓度为50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml,500ng/ml的放线菌素D处理Sl-1细胞,24小时后,终浓度为200ng/ml,500ng/ml的放线菌素D处理的细胞出现较明显的细胞凋亡现象,光学显微镜下可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞碎裂成凋亡小体;DAPI染色荧光,显示细胞核逐渐形变,直至碎裂成小块而被凋亡小体包裹;DNA琼脂凝胶电泳呈典型的凋亡细胞DNA梯形条带;流式细胞仪检测结果,对照和以上四种浓度的放线菌素D处理的细胞凋亡率分别为3.43%,10.61%,15.60%,32.67%,72.24%;证明一定浓度的放线菌素D能地诱导Sl-1细胞凋亡,且成剂量正相关。 有关血淋巴研究的报道,主要是家蚕血淋巴抑制细胞凋亡的作用,还有Lonomia obliqua血淋巴促进细胞生长和延长细胞寿命的研究。血淋巴作为细胞培养基主要有三种效果:促进生长,养分和延长细胞寿命。相关报道证明,昆虫血淋巴抑制病毒诱导的细胞凋亡,也能抑制由多种化学物质如放线菌素D,喜树碱和星形孢菌素,丁酸钠诱导的细胞凋亡。本文研究了甜菜夜蛾和棉铃虫血淋巴抑制化学物质细胞放线菌素D诱导的细胞凋亡的作用。昆虫血淋巴是从五龄幼虫中收集:60℃水浴6分钟,剪去一对腹足,收集血淋巴,再60℃水浴24分钟,离心,上清液0.2微米滤膜抽滤,配制细胞培养基。用不同浓度的甜菜夜蛾和棉铃虫血淋巴(分别含1%,3%,5%)与含5%胎牛血清的Grace’s培养基培养Sl-1细胞,24小时后,能明显地观察到抑制放线菌素D诱导的细胞凋亡的作用,在光学显微镜下观察,血淋巴浓度越高出现的凋亡小体越少;DAPI荧光染色后发现血淋巴浓度高的凋亡小体也少;流式细胞仪检测得到的结果为,得出血淋巴浓度越高,细胞凋亡越少,且甜菜夜蛾血淋巴的抑制效果比棉铃虫血淋巴更好,通过对甜菜夜蛾及棉铃虫血淋巴抑制放线菌素D(ActD)诱导的Sl-1细胞凋亡动力学研究,发现甜菜夜蛾及棉铃虫血淋巴抑制细胞凋亡效果为凋亡率是将近是对照的一半。 根据本实验结果和以前的相关报道分析,初步推断昆虫血淋巴抑制细胞凋亡具有广泛性。