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目的:吗啡为经典的外源性阿片受体激动剂,具有良好的镇痛作用,但长期使用吗啡会产生耐受,影响其在临床上的应用。探明吗啡耐受的机制有助于临床上更有效地应用吗啡治疗疼痛,然而到目前为止,关于吗啡耐受的机制尚未得到确切结论。本课题拟开展ghrelin受体拮抗剂[D-Lys~3]-GHRP-6对吗啡耐受的作用研究,进一步探索其相关的分子机制。本课题的顺利完成为探索吗啡耐受机制打下基础,为寻找降低吗啡副作用的药物提供参考。方法:本课题采用建立慢性小鼠吗啡耐受模型,探索ghrelin受体拮抗剂[D-Lys~3]-GHRP-6对吗啡耐受的影响及机制。通过分子生物学方法分析小鼠吗啡耐受模型中[D-Lys~3]-GHRP-6引起的大脑中相关基因的转录与表达,以及炎症因子的含量变化,采用免疫荧光双标方法来确定相关蛋白的表达位置。结果:1、行为学甩尾实验数据表明注射吗啡组由第1天至第6天,吗啡的镇痛作用逐渐降低,形成耐受;[D-Lys~3]-GHRP-6抑制了吗啡的耐受,P<0.05,具有统计学意义。2、RT-PCR检测相关基因的表达,结果显示:吗啡耐受组中,Oprm1、Oprd以及NOS1转录增加,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对吗啡耐受组转录下降;吗啡耐受组中,Grin1转录下降,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对于吗啡耐受组转录增加;ghrelin在吗啡耐受组中转录增加,在吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组中转录增加显著;吗啡耐受组中,GHSR转录无明显变化,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对于吗啡耐受组转录增加。以上变化具有显著性,具有统计学意义。3、进一步Western blot检测结果显示:吗啡耐受组Grin1蛋白表达下降,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对吗啡耐受组表达增加;吗啡耐受组Oprm1表达增加,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对吗啡耐受组表达下降;以上变化有显著性,具有统计学意义。4、ELISA结果数据显示:吗啡耐受组炎症因子TNFα含量增多,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对吗啡耐受组含量下降;吗啡耐受组炎症因子IL-1β含量下降,吗啡+[D-Lys~3]-GHRP-6组相对吗啡耐受组含量增加;以上变化有显著性,具有统计学意义。5、免疫荧光双标显示ghrelin、Grin1和Oprm1蛋白主要分布在LV(侧脑室)、LSD(外侧隔阂背侧)、LSV(外侧隔阂腹侧)、LSI(外侧隔阂中间部分)、cg(扣带回)、cc(胼胝体)和CPu(尾状核)位置,其主要分布在LV(侧脑室)、LSD(外侧隔阂背侧)、LSV(外侧隔阂腹侧)和LSI(外侧隔阂中间部分)位置。结论:Ghrelin受体拮抗剂[D-Lys~3]-GHRP-6可抑制吗啡耐受,且作用明显。Ghrelin受体拮抗剂[D-Lys~3]-GHRP-6抑制吗啡耐受的机制是通过Oprm1、Grin1和NOS1基因的表达变化实现的;以及通过炎性因子TNFα、IL-1β含量变化来实现的。Ghrelin、Grin1和Oprm1蛋白主要表达部位是中枢脑室周围。