小鼠睾丸管周肌样细胞功能的初步研究

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目前,小鼠睾丸管周肌样细胞的相关研究还处于初步阶段。因此,我们利用沉默或过表达原代培养的管周肌样细胞中GATA4的方法,条件性基因敲除小鼠模型(Wlsflox/flox;Myh11-cre)和细胞剔除策略(Amh-Cre;DTA小鼠模型)对小鼠睾丸管周肌样细胞的功能进行了研究。本论文由三个部分组成,第一部分是研究GATA4对小鼠管周肌样细胞收缩的调控,第二部分是研究小鼠睾丸管周肌样细胞中WNT分泌的阻塞对小鼠繁殖力的影响,第三部分是研究胚胎期小鼠睾丸中支持细胞(Sertoli细胞)对管周肌样细胞和胚胎间质细胞(胚胎Leydig细胞)的影响。  管周肌样细胞的收缩减弱可能导致男性的亚不育或不育。Sertoli细胞和Leydig细胞中的转录因子GATA4对小鼠的精子发生很重要,但是GATA4在管周肌样细胞中的潜在作用较少被人们关注。我们通过胶原胶收缩实验来反应管周肌样细胞的收缩情况。在原代培养的小鼠管周肌样细胞中,siRNA沉默管周肌样细胞中的GATA4增加了管周肌样细胞的收缩能力,然而,过表达管周肌样细胞中的GATA4显著性地削弱了管周肌样细胞的收缩能力。通过RNA测序和实时荧光定量PCR,我们确定了管周肌样细胞中Gata4siRNA处理和Gata4腺病毒处理后表达情况相反的基因。聚类分析表明,这些基因主要富集于四个通路:离子通道;平滑肌功能;细胞因子和趋化因子;细胞骨架、粘附和细胞外基质。根据以上结果,我们推测GATA4介导管周肌样细胞收缩的抑制至少有一部分原因是通过调节离子通道(Kcnk12、Kcnq5、Atpla3和Nalcn)和平滑肌收缩(Nppb、Gpr4、Ednrb和Agt)通路相关基因。  Wntless(Wls)基因控制着各类WNT的分泌。Wls基因的敲除可以用来研究WNT信号在睾丸中的作用。管周肌样细胞作为生精上皮的一种重要的细胞成分,参与曲细精管的收缩、精原干细胞的自我更新和雄性生殖。为了探究管周肌样细胞中分泌的WNTs的潜在作用,我们通过Wlsflox/flox小鼠和Myh11-cre小鼠交配,获得了Wlsflox/flox;Myh11-cre(PM-WLSKO)条件性敲除小鼠,并进一步检测了该雄性小鼠的生殖力。我们发现,PM-WLSKO小鼠的生殖力、睾丸和附睾的形态以及体细胞和生殖细胞的免疫荧光染色正常。因此,小鼠管周肌样细胞中WNT分泌的阻塞独立于雄性生殖力。  Sertoli细胞作为睾丸分化的组织中心,影响着睾丸索的形成,穆勒氏管的退化以及生殖细胞、管周肌样细胞、胚胎Leydig细胞和内皮细胞的分化与功能。Sertoli细胞、Leydig细胞和管周肌样细胞是睾丸中主要的三种体细胞类型。Sertoli细胞和管周肌样细胞、Leydig细胞、生殖细胞之间存在着复杂的相互作用。已有研究报道,在成年小鼠睾丸中,Sertoli细胞具有维持Leydig细胞数目和管周肌样细胞活性的作用;在青春期前的小鼠睾丸中,Sertoli细胞具有调控管周肌样细胞命运和维持成年Leydig细胞发育的作用。目前,还未有人研究过胚胎期小鼠睾丸中Sertoli细胞对管周肌样细胞和胚胎Leydig细胞的作用。因此,我们利用了Amh-Cre;DTA小鼠模型来探究胚胎期睾丸中Sertoli细胞对管周肌样细胞和Leydig细胞的影响。结果表明,在胚胎期小鼠睾丸中,Sertoli细胞具有调控着管周肌样细胞的定位与数目和维持胚胎期Leydig细胞增殖静息的作用。
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