【摘 要】
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目的:探究雌二醇（Estradiol,E2）结合其受体ERβ对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法:PCR扩增ESR2（重组人雌激素受体β）序列并构建腺病毒重组质粒p Ad-ESR2,在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-si RNA处理人正常软骨细胞C28I2,分别设置对照组（DMSO）;E2组（E2）;Ad-ESR2组（Ad-ESR2）;E2+Ad-GF
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目的:探究雌二醇（Estradiol,E2）结合其受体ERβ对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法:PCR扩增ESR2（重组人雌激素受体β）序列并构建腺病毒重组质粒p Ad-ESR2,在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-si RNA处理人正常软骨细胞C28I2,分别设置对照组（DMSO）;E2组（E2）;Ad-ESR2组（Ad-ESR2）;E2+Ad-GFP组（E2+Ad-GFP）;E2+Ad-ESR2组（E2+Ad-ESR2）;E2+sicontrol组（sicontrol+E2）;E2+ESR2-si1组（ESR2-si1+E2）;E2+ESR2-si3组（ESR2-si3+E2）。使用免疫印迹测定ER Stress和细胞凋亡相关蛋白表达情况,通过q RT-PCR检测增殖相关标志基因的表达,借助Ed U试剂盒和流式细胞术测定细胞增殖和凋亡情况。使用ERK通路抑制剂U0126分别设定E2组（E2）;E2+U0126组（E2+U0126）;E2+Ad-ESR2组（E2+Ad-ESR2）;E2+Ad-ESR2+U0126组（E2+Ad-ESR2+U0126）。通过免疫印迹实验探究C28I2细胞中E2通过ERβ调控ERK信号通路影响ER stress和凋亡。结果:（1）成功构建过表达腺病毒Ad-ESR2和ESR2-si RNA;（2）过表达Ad-ESR2能够促进E2处理后IRE1α[1.20±0.06 vs 0.95±0.05,P<0.05]、PERK[1.29±0.04 vs 1.03±0.02,P<0.05]和XBP1s[1.17±0.03vs 0.82±0.02,P<0.05]的表达,促进凋亡Cleaved Caspase12[1.04±0.02vs 0.87±0.04,P<0.05]、抑制增殖相关标志基因PCNA[0.24±0.01 vs0.59±0.07,P<0.05]、Cyclin B1[0.22±0.01 vs 1.03±0.06,P<0.05]、Cyclin D1[0.26±0.02 vs 0.63±0.02,P<0.05]的表达,且ERK磷酸化激活降低[0.83±0.03 vs 1.95±0.12,P<0.05];（3）转染ESR2-si RNA后,细胞的内质网应激相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达降低,与细胞增殖相关的基因被上调,且细胞内p ERK/ERK比值相对增加。（4）经特异性ERK通路抑制剂U0126处理后,雌激素结合ERβ促进的内质网应激蛋白及细胞凋亡蛋白的表达被拮抗。结论:雌二醇靶向ERβ通过激活ERK通路磷酸化调控内质网应激及凋亡,进而抑制软骨细胞增殖。
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