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[目的]胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)是一种具有抗氧化应激作用的珠蛋白,研究显示CYGB能够通过抗氧化应激来达到细胞保护作用。本文旨在探讨人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)在氧化损伤过程中CYGB的表达;构建CYGB表达/干扰质粒HUVECs模型,研究CYGB在氧化应激过程中对HUVECs的保护作用并探讨可能的机制。[方法]1、培养HUVECs,倒置显微镜下观察细胞形态。2、实验分为4组:对照组,25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL、200μg/ml oxLDL处理组;Western blot检测HUVECs在不同浓度oxLDL刺激24h后,细胞内CYGB蛋白的表达水平;Western blot检测HUVECs在100μg/ml oxLDL刺激不同时间(4、8、12、24h)后,细胞内CYGB蛋白的表达水平。3、将HUVECs分为4组:对照组、100μg/ml oxLDL组、100μg/ml oxLDL+CYGB组及100μg/ml oxLDL+CYGB sh RNA组,然后观察在氧化应激时CYGB对HUVECs的作用。于24h后,检测CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)的活性以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,以及Bcl2和Bax的蛋白水平;4、将HUVECs分为3组:对照组、100μg/ml oxLDL组、100μg/ml oxLDL+Staurosporine(PKC抑制剂)组。观察PKC抑制剂在oxLDL诱导HUVECs损伤中的作用。检测CYGB蛋白水平、GSH-PX、SOD、LDH、MDA、Bcl2和Bax的蛋白水平。[结果]1、倒置显微镜下显示,正常HUVECs呈现典型铺路石状态。2、Western blot结果显示:0,25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL处理HUVECs 24h后,CYGB表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);100μg/ml oxLDL处理HUVECs 4、8、12、24h后,CYGB表达水平高于对照组,在24h组CYGB表达水平最高,差异有统计学意义(P<0.05)。3、转染CYGB表达质粒后HUVECs中CYGB的表达明显增加;转染CYGB干扰质粒后HUVECs中CYGB的表达明显降低。4、Western blot结果显示:100μg/ml oxLDL组和100μg/ml oxLDL+CYGB组中CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组,而100μg/ml oxLDL+CYGB shRNA组中CYGB蛋白表达水平则低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与100μg/ml oxLDL组相比,100μg/ml oxLDL+CYGB组中细胞SOD、GSH-PX活性显著提高,Bcl2的表达也显著增加(P<0.05),LDH的活性和MDA的含量明显降低,Bax的表达明显降低(P<0.05);与100μg/ml oxLDL组相比,100μg/ml oxLDL+CYGB sh RNA组中细胞SOD、GSH-PX活性显著降低,Bcl2的表达降低(P<0.05),LDH的活性和MDA的含量明显升高,Bax的表达增加(P<0.05)。5、Western blot结果显示:与正常对照组相比,100μg/ml oxLDL组CYGB表达升高;而与100μg/ml oxLDL组相比,100μg/ml oxLDL+Staurosporine组中CYGB蛋白表达水平降低(P<0.05);与100μg/ml oxLDL组相比,100μg/ml oxLDL+Staurosporine组中细胞SOD、GSH-PX明显降低,Bcl2的表达也显著降低(P<0.05),LDH的活性和MDA的含量明显升高,Bax的表达明显增加(P<0.05)。[结论]1、CYGB在oxLDL引起的内皮细胞损伤中能发挥拮抗作用;2、CYGB发挥拮抗作用可能与PKC信号通路有关。