瑞士乳杆菌S-层蛋白基因的克隆与表达

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乳酸菌在自然界分布广泛,特别是在碳水化合物和蛋白质丰富的地方如植物和发酵食品,属G+菌,以发酵糖类生成乳酸为主要特点或以乳酸为主要终产物。而且,乳酸菌还是人和动物肠道及泌尿生殖道的正常菌群。如嗜酸乳杆菌,短乳杆菌及瑞士乳杆菌等。瑞士乳杆菌是同型发酵嗜热乳酸菌,常用于瑞士产及意大利长成熟期型乳酪,比如瑞士多孔奶酪,格拉那奶酪,及普罗卧干酪奶酪等。而且瑞士乳杆菌是应用最普遍的自然发酵剂。S-层蛋白(surface layer protein, slp)是一些细菌及古细菌细胞壁表面所包被的生物活性大分子。这种蛋白能够形成周期性的有序结构,如倾斜形,正方形或是匀称的六边形。最新研究表明,这些结构是通过非共价键相互作用,在熵驱动下自我组装而成。鉴于其高度周期有序的多孔超微结果,使S-层蛋白在生物技术、纳米技术、生物医学等方面都具有多种应用前景。对于S-层蛋白的功能还不是很清楚,目前认为它具有保护菌体避开不利环境,维持细胞形状及黏附功能。许多乳酸菌能够黏附到小肠上皮细胞,Caco-2细胞,黏液,DC (dendritic cell)及胞外基质(extracellular matrix)等。此外经提取的S-层蛋白还能够抑制肠出血性大肠埃希菌与宿主上皮细胞的黏附作用。在本研究中,通过PCR获得了瑞士乳杆S-层蛋白的基因,并表达于大肠杆菌JM109中,为将来开展进一步研究打下了基础,得到了以下主要研究结果。1以瑞士乳杆菌ATCC 15009 S-层蛋白基因为模板,利用primier5.0设计引物,通过PCR得到瑞士乳杆菌S-层蛋白基因。2成功将瑞士乳杆菌S-层蛋白基因表达于E.coli JM109中,而且在20℃,0.6 mM IPTG,150rpm条件下诱导过夜,蛋白表达量较大,经Ni-NTA纯化,得到了较纯的蛋白,可以用于下一步的研究。
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