不同荧光定量检测PCR试剂在慢性HBV感染者中的应用

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目的评价国产普通荧光定量PCR技术与罗氏内标法荧光定量PCR技术在HBV检测中的意义。方法采集安徽医科大学第一附属医院2014年3月-12月HBV患者的血清190份,分别用上述方法进行检测,通过相关性分析和Kappa检验评价两种试剂检测结果之间的差异性及一致性。结果1.对于总的190份标本,排除190份标本中低于国产荧光定量PCR试剂检测下限者(HBV-DNA≤500IU/ml)72份和高于罗氏Cobas Taq Man 48试剂检测上限者(HBV-DNA≥1.7×108IU/ml)7份,余下可进行相关性分析的标本为111份,进行相关性分析,我们可以看出,P<0.05,R2=0.6707,有统计学的意义,表明国产荧光定量PCR试剂与罗氏COBAS Taq Man试剂检测结果有相关性,并呈现线性相关;2.分成HBe Ag(+)与HBe Ag(-)两组比较,分别进行两种检测方法的相关性的分析,我们可以看出,两组的P值都小于0.05,从统计学的方面,都是有意义的,表明两组中,两种检测方法都是有相关性的,并且两种相关性是线性的关系。同时我们可以看到HBe Ag(-)组和HBe Ag(+)组的R2值分别为0.5864、0.5226,可见两组相比HBe Ag(+)组国产试剂与罗氏COBAS试剂具有更高的相关性。3.根据2010版的慢乙肝防治指南中不同HBe Ag状态的抗病毒治疗时HBV DNA的要求,可将190份国产试剂检测标本可分为四组即HBe Ag(+)、HBV DNA<20,000 IU/ml组,HBe Ag(+)、HBV DNA>20,000 IU/ml组、HBe Ag(-)、HBV DNA<20,00IU/ml组和HBe Ag(-)、HBV DNA>20,00IU/ml组,分别进行国产试剂检测结果与罗氏COBAS检测结果进行比较,我们可以看出,对于高病毒载量患者,无论HBe Ag如何,与罗氏COBAS试剂相比,国产试剂的可靠性均较高,而对于低病毒载量患者,国产试剂的可靠性较差,尤其对于HBe Ag(-)者;4.根据不同HBe Ag状态和抗病毒要求的DNA载量对总标本进行一致性分析,HBe Ag(+)组98例,根据抗病毒要求将HBV DNA≥20,000IU/ml,设为检测结果阳性,而HBV-DNA<20,000 IU/ml设为阴性;其Kappa值为0.752,说明国产试剂检测与Cobas Taq Man试剂检测一致性较高;HBe Ag(-)组92例,将HBV-DNA≥2,000IU/ml,设为检测结果阳性,而HBV DNA<2,000 IU/ml设为阴性;其Kappa值为0.381,其检测值<0.4,说明国产试剂检测与Cobas Taq Man试剂检测一致性较差。结论本研究结果显示国产试剂与罗氏Cobas试剂具有较好的相关性(r=0.798,P<0.05),并呈线性相关(R2=0.6677,P<0.05),表明国产试剂检测结果总体上反映血清中HBV DNA水平;(2)对于HBe Ag(+)患者,可以应用国产试剂检测患者的HBV-DNA水平,而对于HBe Ag(-)患者,建议应用Cobas试剂检测其患者的HBV-DNA水平。
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