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目的:肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要类型。临床上,以顺铂(cis-Dichlorodiamineplatinum,DDP)为基础的化疗方案是NSCLC的一线治疗方案,但肺癌患者通常会出现对顺铂耐药,从而影响临床化疗疗效。因此,需要开发新药以增加肺癌患者对化疗的敏感性。汉防己甲素(tetrandrine,TET)又名粉防己碱,有抗心肌缺血、抑制血小板聚集、解痉、镇痛、抗炎、调节免疫力等多种药理作用,近年来,汉防己甲素已经被确认为新型抗肿瘤药物,可诱导多种肿瘤细胞凋亡,它单独使用或联合其他化疗药物均具有潜在的抗肿瘤毒性。故本实验旨在探讨TET对DDP所致的A549细胞凋亡与增殖的影响,并探讨其中相关的作用机制。方法:人非小细胞肺癌细胞株A549/DDP细胞和A549细胞均使用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、100 U/ml 青霉素和 100 mg/L 链霉素的RPMI-1640培养基进行常规培养,于A549/DDP细胞的培养基中加入5 μM顺铂,以维持其对顺铂的耐药性。将两种细胞分为:对照组、TET组(浓度分别为 0.5、1、2、4、8 μg/ml)、DDP 组(浓度分别为 6.25、12.5、25、50、100 μM)、DDP+TET 组(TET浓度为 0.25 μg/ml,DDP 浓度分别为 6.25、12.5、25、50、100 μM),药物作用时间为48 h。通过CCK-8实验检测各组细胞活力,计算各组细胞半抑制浓度(IC50)。采用等效线图解法验证TET联合DDP时是否具有协同效应。后续实验分为TET组(TET浓度为:0.25 μg/ml)、DDP组(A549/DDP细胞的DDP浓度为:60μM、A549细胞的DDP浓度为:25μM)、DDP+TET组(TET 浓度为:0.25 μg/ml,A549/DDP 细胞的 DDP 浓度为:60 μM、A549细胞的DDP浓度为:25μM),药物作用时间为12h。采用Hoechst染色法和流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;EdU染色法观察各组细胞增殖情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞凋亡和增殖相关蛋白Bax、Bcl-2、p-Akt表达水平;透射电子显微镜检测自噬小体形成;各组分别加入3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)与药物共同孵育后,重复上述各实验。结果:TET联合DDP对A549/DDP细胞和A549细胞的细胞活力均具有协同抑制作用;Hoechst染色及流式细胞术结果显示DDP+TET组凋亡细胞明显增多,EdU染色可见,和DDP单药组相比,DDP+TET组细胞增殖明显减少,Western blot结果显示DDP+TET组的Bax表达水平上升、Bcl-2表达水平降低、p-Akt表达降低、。故TET可增强DDP诱导的肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖。透射电子显微镜可见DDP+TET组自噬小体形成增多。此外,加入自噬抑制剂3-MA后,CCK-8结果显示各组细胞活力显著升高;与未使用3-MA相比,Hoechst染色及流式细胞术结果显示DDP+TET组凋亡细胞数明显减少,EdU染色提示DDP+TET组增殖细胞数明显增多,Western blot结果显示DDP+TET组Bax表达下调、Bcl-2表达上调、p-Akt表达升高。结论:TET可增强DDP对A549细胞所致的诱导凋亡及抑制增殖的作用。TET可增强A549细胞对顺铂的敏感性,这种增敏作用通过调节PI3K/Akt、Bax/Bcl-2信号通路及自噬而实现。故TET是潜在的增强化疗敏感性、改善肺癌患者预后的药物。