背景荧光猝灭—免疫层析技术在食品快速检测中的应用

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目的:基于背景荧光猝灭-免疫层析法研制快速检测食用油中黄曲霉毒素B1,牛奶中黄曲霉毒素M1和氯霉素,猪肉中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的定量检测卡和建立检测牛奶中林可霉素和卡那霉素的方法。方法:基于背景荧光猝灭-免疫层析法,依据黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、氯霉素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺抗原和抗体的活性,筛选检测系统中T线处最佳的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、氯霉素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺抗原浓度和小试杯中抗体标记浓度,应用最佳检测系统对食用油中黄曲霉毒素B1,牛奶中黄曲霉毒素M1、氯霉素、林可霉素和卡那霉素,猪肉中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺进行方法学验证和样品测定。结果:1.筛选出的最佳黄曲霉毒素B1抗原浓度为0.5mg/mL,黄曲霉毒素B1抗体标记浓度为1.0μg/mL;用于测定食用油中黄曲霉毒素B1的浓度范围为1.3-50.0ng/mL,最低检测限为1.1ng/mL。2.筛选出的最佳黄曲霉毒素M1抗原浓度为0.5mg/mL,黄曲霉毒素M1抗体标记浓度为1.2μg/mL。本方法测定牛奶中AFM1的浓度范围为0.0014-2.0ng/mL,最低检测限为0.0009ng/mL。3.筛选出的最佳氯霉素抗原浓度为0.4mg/mL,氯霉素抗体标记浓度为0.6μg/mL。本方法测定牛奶中氯霉素的浓度范围为0.001-1.0ng/mL,最低检测限为0.0008ng/mL。4.本方法测定牛奶中林可霉素的浓度范围为0.102-60.0ng/mL,最低检测限为0.088ng/mL。5.本方法测定牛奶中卡那霉素的浓度范围为0.2319-60.0ng/mL,最低检测限为0.2003ng/mL。6.筛选出的最佳盐酸克伦特罗抗原浓度为1.5mg/mL,盐酸克伦特罗抗体标记浓度为1.0μg/mL。本方法测定猪肉中盐酸克伦特罗的浓度范围为0.019-2.0ng/mL,最低检测限为0.011ng/mL。7.筛选出的最佳沙丁胺醇抗原浓度为1.0mg/mL,沙丁胺醇抗体标记浓度为0.5μg/mL。本方法测定猪肉中沙丁胺醇的浓度范围为0.016-4.0ng/mL,最低检测限为0.009ng/mL。8.筛选检测系统中最佳莱克多巴胺抗原浓度为0.5mg/mL,莱克多巴胺抗体标记浓度为1.0μg/mL。本方法测定猪肉中莱克多巴胺的浓度范围为0.021-2.0ng/mL,最低检测限为0.007ng/mL。本方法与国标方法检测结果无显著性差异(p>0.05)。结论:本方法是基于抗原、抗体的反应,所以专属性强,灵敏度高;液体样品的检测无需样品前处理,每份样品检测仅需8-12min,固体样品则需要前处理后进行检测;此外,将待测物的方法学结果储存于二维码中,可实现快速、准确的检测食用油中黄曲霉毒素B1,牛奶中黄曲霉毒素M1、氯霉素、林可霉素和卡那霉素,猪肉中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺。
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