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血管紧张素转化酶(Angiotensin I-Converting Enzyme,ACE)抑制肽是一种对ACE活性具有抑制作用的多肽,一般由2~20个氨基酸残基组成。ACE抑制肽通过与ACE发生竞争性结合,能阻断血管紧张素Ⅱ生成、促进舒缓肽和脑啡肽生成,从而起到降压作用。目前,已有从绿豆、大豆、酪蛋白、牛乳、麦胚蛋白、牡蛎等原料中制备ACE抑制肽的报道,而以魔芋为原料制备ACE抑制肽的资料甚少。检测结果发现,富含蛋白的魔芋飞粉经过酶法降解可产生支链氨基酸寡肽、ACE抑制肽、高F值寡肽、甘露聚糖肽等活性肽。对魔芋飞粉这一天然药物资源进行研究开发,有望为ACE抑制肽的制备开辟一条绿色的新途径。本文以魔芋飞粉为原料,采用酶解法制备魔芋ACE抑制肽,依次通过超滤及大孔吸附树脂对制备的ACE抑制肽分离纯化,并对其进行质量检测及理化性质分析。研究结果如下:1.魔芋ACE抑制肽酶解法制备:以ACE抑制率为指标,通过对预实验筛选出的胃蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽的工艺进行单因素考察和正交优化,得到最佳酶解工艺条件为:底物浓度2%、酶用量5000U/g、温度37℃、pH2.5、酶解时间210min,此时酶解液的ACE抑制率为92.65%、多肽得率为12.60%。2.超滤法分离魔芋ACE抑制肽:以ACE抑制率为指标,预选出最佳超滤膜的截留分子量为1kDa。单因素考察及正交实验优化得到的最佳超滤条件为:在多肽液浓度2%、p H4.0、温度40℃的条件下,采用1kDa的超滤膜超滤15min,产物的ACE抑制率可达到92.75%。3.大孔吸附树脂分离魔芋ACE抑制肽:以吸附率和解吸率为指标,通过对预选出的DA201-C型大孔吸附树脂进行吸附-解吸工艺实验,确定出最佳吸附工艺条件为:上样液质量浓度8mg/mL、p H2.0、上样量8mL、上样流速0.5mL/min;解吸工艺条件为:洗脱液乙醇体积分数80%、洗脱流速1.0mL/min、洗脱时间2h。在此条件下,得到的魔芋ACE抑制肽的抑制率为95.19%。4.红外光谱分析:对分离纯化后的魔芋ACE抑制肽及ACE抑制肽标准品进行红外光谱扫描,结果表明,二者的峰形和峰值大体一致,均存在O-H、N-H、酰胺键、C-O、芳烃的C-H弯曲振动等。综合分析结果,魔芋ACE抑制肽与标准品红外光谱特征基本一致。5.采用紫外全波长扫描对魔芋ACE抑制肽进行检测,结果在220nm处有最大吸收峰,与ACE抑制肽标准品基本一致。高效液相色谱法分析结果表明,魔芋ACE抑制肽与标准品峰形特征相似。紫外分光光度法检测出纯化后样品中魔芋ACE抑制肽含量为81.37%。凝胶渗透色谱法测定出魔芋ACE抑制肽的峰值分子量(MP)为655Da,分子量范围为500~700Da。6.魔芋ACE抑制肽理化性质分析:分离纯化后得到的魔芋ACE抑制肽为灰白色固体粉末,有腥臭味;室温下pH2.0时在水中的溶解率可达95%左右;30~50℃下稳定性较好,但90℃水浴下5h后其ACE抑制率几乎为零;在pH2.0~4.0范围内室温放置2h ACE抑制活性无明显变化,但随着p H值逐渐增大,ACE抑制活性会逐渐降低;NaCl浓度为0.2~0.6mol/L时室温放置2h ACE抑制率仍能维持在90%左右;37℃下魔芋ACE抑制肽在消化酶中稳定性较好,ACE抑制率基本维持在85%。