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糙刺参(Stichopus horrens)是一种具有重要食用和药用价值的热带经济海参种类。海参是一类有机碎屑食性的底栖棘皮动物,其肠道细菌在海参饵料的消化和吸收过程中发挥着重要作用。本文首次对糙刺参肠道细菌进行了分离、纯化,并对其产胞外酶能力进行了分析,确定了2株具有溶藻活性的细菌,并分别对这两株菌的溶藻特性进行了研究。 1.应用纯培养方法对糙刺参肠道菌进行了分离、纯化,并应用特异性培养基筛选法对菌株产酶能力进行了分析。结果显示,从糙刺参肠道中共分离出细菌95株,其中具产淀粉酶、蛋白酶、明胶酶、褐藻胶裂解酶和纤维素酶能力的菌株分别占83.2%、65.3%、27.4%、21.1%和5.3%,说明糙刺参肠道菌能很好地消化富含淀粉和蛋白质的饵料;本文还讨论了这些具有产胞外酶能力的细菌在糙刺参食物消化及生理功能中的作用。 2.分别应用直接筛选法与酶解法对糙刺参肠道菌中具有溶藻活性的细菌进行了筛选,得到2株目标菌S088和H043。通过16S rRNA分子鉴定技术,结合Biolog生化鉴定技术对目标菌株进行种属鉴定,结果显示S088为脱氮胞鳗氏菌(Bowmanella denitrificans),H043为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)细菌。 3.对一株脱氮胞鳗氏菌Bowmanella denitrificans S088的溶藻特性及在海参饵料中的应用进行了初步研究。结果显示,S088的溶藻活性与菌藻共培养体系中的菌液初始浓度密切相关,且当菌藻共培养液置于30℃,全黑暗的光照条件下时,其溶藻活性达到最大值;该菌通过分泌热稳定性的胞外小分子物质进行溶藻,该分泌物对鲤鱼上皮瘤细胞无细胞毒性。 4.对一株假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.H043的产酶活性、溶藻特性及在海参饵料中的应用进行了初步研究。结果显示,H043能分泌高活性的褐藻胶裂解酶和纤维素酶,当这两种酶分别作用于马尾藻时,无明显的溶藻效果产生;但将这两种酶以3∶1(酶活比)的比例混合时,新鲜马尾藻叶片和马尾藻粉均产生较多的单细胞碎片,溶藻效果明显。