P53在沉默COX-2抑制肝星状细胞增殖中的作用

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:crazyinlove_2008
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目的通过研究P53信号通路在沉默COX-2抑制肝星状细胞增殖中的作用,初步探讨沉默COX-2抑制肝星状细胞增殖的作用机制。方法1.实验分为空载体组、COX-2shRNA转染组、空载体组+PFT-α组、COX-2shRNA转染+PFT-α组。2.采用COX-2shRNA片段的荧光质粒,利用脂质体LiplofectamineTM2000转染大鼠HSC,在荧光显微镜下判定细胞质粒的转染率。3.应用MTT比色来检测HSC-T6细胞增殖情况。4.采用Q-PCR法测定各组细胞中P53,a-SMA(Acta-2)mRNA的表达结果。结果1.COX-2shRNA转染大鼠肝星状细胞48h后,在荧光显微镜下观察,胞质中出现绿色荧光即为转染细胞,转染率可达70%以上。2.MTT检测出OD490光吸收值A值显示,沉默COX-2可以抑制肝星状细胞的增殖。PFT-α能够逆转沉默COX-2对肝星状细胞的抑制作用。3.COX-2shRNA转染组中P53 mRNA的表达水平对比空载体组、COX-2shRNA转染组+PFT-α组均上调(P<0.01);空载体+PFT-α组、与空载体组相比,P53 mRNA的表达水平下调(P<0.01)。4.COX-2shRNA转染组中α-SMA mRNA的表达水平对比空载体组、COX-2shRNA转染+PFT-α组均下调(P<0.01);空载体+PFT-α组与空载体组比较,α-SMA mRNA的表达水平上调(P<0.01)。结论沉默COX-2能够抑制HSC-T6的增殖,该抑制作用能够被P53信号通路抑制剂PFT-α逆转,提示shRNA沉默COX-2可能通过影响P53信号通路来抑制肝星状细胞增殖。
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