【摘 要】
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目的：本研究通过脂质体转染技术建立PTP-PEST稳定高表达的HepG2细胞株,利用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术对稳定高表达PTP-PEST的HepG2细胞内相关基因和蛋白进行
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目的：本研究通过脂质体转染技术建立PTP-PEST稳定高表达的HepG2细胞株,利用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术对稳定高表达PTP-PEST的HepG2细胞内相关基因和蛋白进行分析,MTT法观测不同HepG2细胞株的增殖速率,初步探讨PTP-PEST对肝癌细胞增殖的影响以及可能涉及的信号传导网络。方法：1.构建PTP-PEST真核表达质粒pcDNA3.1/PTP-PEST,并和空载体pcDNA3.1分别转染HepG2细胞,G418筛选稳定转染细胞克隆。2.用RT-PCR和实时荧光定量法检测PTP-PEST的mRNA含量,Western Blot筛选PTP-PEST蛋白表达改变的稳定细胞转染株。3.应用Real-time PCR、Western Blot及MTT法观察高表达PTP-PEST对HepG2细胞内相关基因表达量的影响以及HepG2细胞体外增殖能力的改变。结果：1.RT-PCR、实时荧光定量PCR和Western Blot实验结果表明,PTP-PEST稳定高表达的HepG2肝癌细胞株已经建立。2.PTP-PEST对HepG2肝癌细胞的影响：①PTP-PEST使细胞增殖速度加快；②PTP-PEST促进了细胞内Ras、Grb2和PSTPIP基因水平的上调,并在蛋白水平验证了Grb2表达升高。结论：1.成功构建PTP-PEST高表达HepG2细胞株。2.PTP-PEST表达改变主要是促进肝癌细胞的体外增殖速度,对HepG2肝癌细胞内的Grb2、Ras、和PSTPIP基因有上调作用,并在蛋白水平验证了Grb2表达升高。3.基于Grb2是Ras信号通路的上游调控蛋白,PTP-PEST能通过Grb2/Ras信号途径参与HepG2细胞增殖调控。
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