【摘 要】
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目的本研究是就大肠杆菌感染大鼠肠上皮细胞后LncRNA发生的变化进行的研究,找到较大变化且与细胞感染相关的LncRNA,对其功能进行验证。方法通过MTT法获得最佳的大肠杆菌作用肠上皮细胞的浓度与时间,收集此浓度时间的细胞,进行测序分析,通过生物信息学分析、对细胞抗感染、抗炎通路的分析、筛选到目的LncRNA NONRATT006155.2。构建NONRATT006155.2过表达IEC-6细胞,通
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目的本研究是就大肠杆菌感染大鼠肠上皮细胞后LncRNA发生的变化进行的研究,找到较大变化且与细胞感染相关的LncRNA,对其功能进行验证。方法通过MTT法获得最佳的大肠杆菌作用肠上皮细胞的浓度与时间,收集此浓度时间的细胞,进行测序分析,通过生物信息学分析、对细胞抗感染、抗炎通路的分析、筛选到目的LncRNA NONRATT006155.2。构建NONRATT006155.2过表达IEC-6细胞,通过定量PCR检测NONRATT006155.2的转染效率情况,通过western blot检测促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(mitogenactivated protein kinase kinase kinase kinase 3,MAP4K3)和β-防御素-2蛋白水平的表达情况。用MTT法检测此时细胞的活性。结果10~3个/m L的大肠杆菌在24h时对细胞的抑制率最佳。通过测序分析得到NONRATT006155.2降低明显,与MAP4K3的表达水平有关系,并对β-防御素-2的表达有影响。成功构建了NONRATT006155.2的IEC-6的过表达细胞,通过定量PCR检测发现用10~3个/m L大肠杆菌作用已经转染了NONRATT006155.2过表达质粒(mimic质粒)的大鼠肠上皮细胞(IEC-6)中,NONRATT006155.2的表达量最高,显著高于空白对照组(未做任何处理)、大肠杆菌组(只用大肠杆菌处理)和大肠+NC组(大肠杆菌感染已经转染了空质粒的细胞,P<0.05)。而在大肠杆菌组和大肠+NC组中,NONRATT006155.2的表达水平显著低于空白对照组(P<0.05)。在大肠+mimic组中,细胞的抑制率在随着作用时间的增加逐渐降低(P<0.05),显著低于同时间点的大肠组和大肠+NC组的细胞抑制率(P<0.05)。通过western blot检测,MAP4K3和β-防御素-2在蛋白水平的表达,在大肠+mimic组中的表达量最低,显著低于其他三组P<0.05),而在大肠组和大肠+NC组中的表达最高,明显高于空白对照组P<0.05),而大肠组和大肠+NC组中的表达没有显著差异(P>0.05)。结论过本研究发现当大肠杆菌感染IEC-6后NONRATT006155.2的表达与MAP4K3和β-防御素-2的表达呈负相关。NONRATT006155.2参与了对MAP4K3和β-防御素-2表达的调控。
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