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目的:在泌尿外科肿瘤疾病中,肾癌发生率位于第二位,其中又以肾透明细胞癌(ccRCC)最为常见。由于缺乏有效的预测指标及治疗靶点,肾癌死亡率较高。采用生物芯片检测,筛选出ccRCC肿瘤组织及对应的瘤旁组织表达量差别较大的基因。远端上游原件结合蛋白1 (FUBP1)是原癌基因c-myc转录过程的反式激活因子,在肿瘤形成中具有重要作用。FUBP1在ccRCC中表达水平及功能尚无研究。方法:通过实时荧光定量PCR ( Real-timePCR ),免疫印迹试验(western-blot)及免疫组织化学的方法分析FUBP1表达情况(包括:56对ccRCC肿瘤及瘤旁组织、人胚肾上皮细胞系HKC、肿瘤细胞系786-O、Caki-1),并采用相关性分析和生存分析分别检测肿瘤组织FUBP1基因的mRNA表达水平和临床病理特点及预后的相关性。细胞系及功能实验:人胚肾上皮细胞系HKC、肿瘤细胞系786-O、Caki-1培养于含5%C02、37℃的培养箱中。利用小RNA干扰序列,特异降低FUBP1表达,并通过流式细胞仪及MTS法、平板克隆实验、软琼脂集落培养实验来检测细胞增殖能力变化。免疫组化:共检测了 49对肾透明细胞癌患者肿瘤及瘤旁组织4um石蜡切片,最终的染色指数根据阳性染色率分为阴性及阳性。结果:1.在ccRCC患者,FUBP1在肿瘤组织表达水平高于其对应的瘤旁组织(包括mRNA水平及蛋白水平)。表明FUBP1在ccRCC患者肿瘤发生过程中起促癌基因的作用。2.通过MTS实验、克隆形成实验,我们知道在786-O、caki-1细胞系中,敲低基因FUBP1的表达能抑制细胞的增殖。此外,从软琼脂集落培养实验结果:敲低FUBP1表达的786-O、caki-1细胞后,集落数减少,细胞增殖力降低。3.敲低FUBP1抑制786-O、Caki-1细胞系增殖处于G1-S期阶段。与对照组相比,敲低FUBP1基因表达后,细胞多数停滞于G0/G1期,而S期细胞比例明显降低。4.FUBP1抑制786-O、Caki-1细胞凋亡。通过流式细胞仪分选,一些蛋白标记物(如活性蛋白酶)可提示细胞凋亡,在敲低FUBP1的786-0及Caki-1细胞系中表达明显增加。在786-0及Caki-1细胞系中,敲低FUBP1基因表达后,细胞更多处于凋亡阶段(膜联蛋白V荧光素阳性率高所提示)。5. c-myc及p21与FUBP1的mRNA表达水平呈正相关。结论:实验结果表明,在肾透明细胞癌患者,FUBP1在肿瘤组织表达水平高于其对应的瘤旁组织。FUBP1能促进肾癌细胞系的增殖,且使细胞凋亡速度减慢。