目的:观察淫羊藿苷介导Nrf-2/ARE信号通路对激素抵抗型哮喘小鼠及气道上皮细胞中HDAC2及GR的影响,探讨淫羊藿苷治疗激素抵抗型哮喘的作用靶点及其作用机制。方法:1.SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为以下5组:正常对照组、模型组、淫羊藿苷组、地塞米松组、淫羊藿苷联合地塞米松组,每组10只。采用卵蛋白腹腔注射、雾化激发以及脂多糖滴鼻的方式建立激素抵抗型哮喘小鼠模型,且药物干预与造模同时进行。淫羊藿苷组及淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠于雾化激发前1h给予淫羊藿苷灌胃（50mg/kg）,地塞米松组及淫羊藿苷联合地塞米松组于雾化激发前30min给予腹腔注射地塞米松（3 mg/kg）,且正常对照组、模型组以及各药物干预组亦以等剂量磷酸盐缓冲液对各组小鼠进行对等灌胃和（或）腹腔注射干预,日1次。观察各组小鼠一般状态;HE染色法观察肺组织病理形态学变化情况;ELISA方法检测各组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平以及血清中IgE水平;采用Real-Time PCR方法以及Western Blot方法分别检测各组小鼠肺组织中Nrf-2、HDAC2、GR基因及蛋白的表达情况。2.利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人气道上皮细胞16HBE中Nrf-2基因,并以CSE诱导造模。将对数生长期的16HBE细胞分别给予2.5%、5%、10%浓度的CSE对其干预6h、12h、24h及48h,以明确CSE的最佳干预浓度及干预时间。将培养的16HBE及Nrf-2基因敲除16HBE分为以下5组:16HBE组、Nrf-2^-/-16HBE组、Nrf-2^-/-16HBE+CSE组、Nrf-2^-/-16HBE+CSE+DEX组、Nrf-2^-/-16HBE+CSE+ICA组。16HBE组及Nrf-2-/-16HBE组正常培养,其余3组均以最佳浓度的CSE进行诱导,而Nrf-2^-/-16HBE+CSE+ICA组及Nrf-2^-/-16HBE+CSE+DEX组在CSE诱导前,分别相应给予ICA及DEX培养基预处理1h。在培养结束后,采用Real-Time PCR方法以及Western Blot方法分别检测各组小鼠肺组织中HDAC2、GR基因及蛋白的表达情况。结果:1.小鼠一般状态显示,模型组小鼠在激发开始后出现急躁多动、点头呼吸且频率增快、蜷缩等症状,而随着刺激的增加,亦可见其活跃程度减低,反应不灵敏,并伴有持续性的喘息,少数亦出现腹部挛缩、二便失禁等症状;淫羊藿苷组、地塞米松组及淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠症状较模型组均有所减轻,而在给药后期可见淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠上述症状缓解明显,并以喘息症状的缓解为著。2.小鼠肺组织HE染色显示,正常对照组小鼠支气管结构基本正常,黏膜完整,未见增生、肥大及炎性细胞的浸润;模型组小鼠管壁及肺泡间质等处见炎性细胞的大量浸润,支气管黏膜皱襞增多,管壁增厚破坏,管腔狭窄,气道上皮细胞增生紊乱,粘液分泌物增多;淫羊藿苷组、地塞米松组及淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织上述病理形态学改变较模型组均有所改善,以淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠改善更为明显。3.ELISA方法检测结果显示,各组SRA模型小鼠BALF中IL-4、IL-13及血清中IgE因子水平较正常对照组均显著增高（P<0.05）,各药物干预组模型小鼠BALF中IL-4、IL-13因子的表达较模型组均降低（P<0.05）,而淫羊藿苷组及地塞米松组小鼠血清中IgE因子的表达较模型组相比,差异不显著（P>0.05）,但淫羊藿苷联合地塞米松组SRA小鼠BALF中IL-4、IL-13及血清中IgE因子的改善效果均优于淫羊藿苷组及地塞米松组（P<0.05）。4.肺组织中Nrf-2表达水平显示,各组SRA模型小鼠肺组织中Nrf-2因子表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,各药物干预组模型小鼠肺组织中Nrf-2因子的表达较模型组均显著提升（P<0.05）,其中淫羊藿苷组小鼠肺组织中Nrf-2因子表达与地塞米松组相比较,未见显著差异（P>0.05）,而淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织中Nrf-2因子的表达明显优于淫羊藿苷组及地塞米松组（P<0.05）。5.肺组织中HDAC2表达水平显示,各组SRA模型小鼠肺组织中HDAC2 m RNA及蛋白的表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,而淫羊藿苷组、地塞米松组及淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织中HDAC2 mRNA及蛋白的表达较模型组均明显升高（P<0.05）,其中淫羊藿苷组小鼠肺组织中HDAC2 mRNA及蛋白的表达与地塞米松组相比,差异不显著（P>0.05）,但淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织中HDAC2 mRNA及蛋白的表达显著优于淫羊藿苷组及地塞米松组（P<0.05）。6.肺组织中GR表达水平显示,各组SRA模型小鼠肺组织中GR mRNA及蛋白表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,而淫羊藿苷组、地塞米松组及淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织中GR mRNA及蛋白的表达较模型组均明显升高（P<0.05）,且淫羊藿苷联合地塞米松组小鼠肺组织中GR mRNA及蛋白的表达显著优于淫羊藿苷组及地塞米松组（P<0.05）。7.不同浓度CSE对16HBE细胞干预6h时的细胞抑制程度较空白组相比,差异不显著（P>0.05）;当干预16HBE细胞12h、24h时,5%及10%浓度的CSE对16HBE细胞的抑制程度均较2.5%CSE组及空白组增加（P<0.05）,当干预16HBE细胞48h时,各浓度组细胞的抑制程度进一步增加,各组组间相比较差异显著（P<0.05）。以5%CSE刺激16HBE细胞24h为最佳干预条件。8.Nrf-2^-/-16HBE中HDAC2表达水平显示,Nrf-2^-/-16HBE组中HDAC2蛋白及mRNA表达水平较16HBE组相比未见显著差异（P>0.05）,而各干预组Nrf-2^-/-16HBE细胞中HDAC2蛋白及m RNA表达水平较Nrf-2^-/-16HBE组及16HBE组显著下降（P<0.05）,且各干预组组间相比较,未见显著差异（P>0.05）。9.Nrf-2^-/-16HBE中GR表达水平显示,Nrf-2^-/-16HBE组中GR蛋白及mRNA表达水平较16HBE组相比未见显著差异（P>0.05）,而各干预组Nrf-2-/-16HBE细胞中GR蛋白及mRNA表达水平较Nrf-2^-/-16HBE组及16HBE组显著下降（P<0.05）,且各干预组组间相比较未见显著差异（P>0.05）。结论:1.淫羊藿苷能够改善SRA模型小鼠的一般状态,减轻SRA模型小鼠肺组织的病理变化,且与地塞米松联合应用效果显著。2.淫羊藿苷能够降低SRA模型小鼠BALF中IL-4、IL-13的表达水平,与地塞米松联合应用效果显著,并可协同地塞米松有效降低模型小鼠血清中IgE的表达水平。3.淫羊藿苷能够提升SRA模型小鼠肺组织中Nrf-2、HDAC2、GR的表达水平,但未能改善Nrf-2-/-16HBE中HDAC2、GR的表达水平,分子机制可能与淫羊藿苷对Nrf-2/ARE信号通路的激活有关。4.淫羊藿苷能够恢复SRA模型小鼠对地塞米松的敏感性,进而协同地塞米松对SRA模型小鼠起到较好的干预作用。