酸性鞘磷脂酶调节的内质网应激信号通路在吴茱萸碱诱导的胃癌SGC-701细胞凋亡中的作用

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:urtracy2009
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目的:明确在吴茱萸碱诱导的胃癌SGC-7901细胞凋亡中起作用的鞘磷脂酶及其调节的内质网应激信号通路在此凋亡中的作用;明确吴茱萸碱诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的作用及对caspase3、caspase8、caspase9蛋白表达的影响。  方法:体外培养人胃癌 SGC-7901及 BGC-823细胞,根据不同的干预方法设置的各组分别作用于SGC-7901细胞24h及不同浓度吴茱萸碱作用BGC-823细胞24h、36h及48h后:①CCK8比色法观察对两种细胞的细胞毒作用;②Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测两种细胞的凋亡率;PI单染检测 BGC-823细胞的周期变化;③电镜观察SGC-7901细胞的内质网结构变化;④Real-time PCR检测SGC-7901中JNK、CHOP、Caspase4基因的表达情况,采用β-actin作内参;⑤western Blotting检测SGC-7901细胞中的JNK、p-JNK、CHOP、Caspase4及BGC-823细胞中caspase3、caspase8、caspase9的蛋白表达情况,β-actin为内参。  结果:①CCK8和Annexin V-FITC/PI双染结果显示:吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,100μM D609能阻滞此凋亡作用;30μM内质网应激抑制剂Salubrinal亦能抑制此凋亡作用;吴茱萸碱可以诱导 BGC-823细胞凋亡(半数抑制浓度为20μM),且诱导的凋亡随时间和剂量的增加而增强;②PI单染结果显示:吴茱萸碱影响了BGC-823细胞的周期分布,使其阻滞于G0/G1期;③电镜结果显示:1.5μM吴茱萸碱单独作用SGC-7901细胞后,内质网显著扩张;与D609同时作用组,内质网无明显改变;④Real-time PCR结果显示:吴茱萸碱作用组中,SGC-7901细胞内的JNK、CHOP、Caspase4基因表达上调;与D609同时作用后,JNK、CHOP、caspase4基因表达下调,差异显著(P?0.05);⑤Western blotting结果显示:吴茱萸碱可使胃癌 SGC-7901细胞内的p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表达增高;加入D609后,p-JNK、CHOP、caspase4表达减低,差异显著(P?0.05);单纯D609组与对照组相比,p-JNK、CHOP、caspase4的表达无差异;吴茱萸碱作用BGC-823细胞24h、36h后caspase3、caspase8、caspase9的表达上调,作用48h后,caspase3、caspase8、caspase9的表达下调。  结论:1.酸性鞘磷脂酶与吴茱萸碱诱导的胃癌SGC-7901细胞凋亡有关;  2.酸性鞘磷脂酶可进一步活化下游的内质网应激信号通路,使p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表达上调而诱导SGC-7901细胞凋亡;  3.吴茱萸碱可使胃癌BGC-823细胞的周期阻滞于G0/G1期,并在一定时间内使caspase3、caspase8、caspase9蛋白表达上调而诱导其凋亡。
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