研究背景与目的:心房纤颤(房颤)是最常见的心律失常之一,目前对于房颤的治疗还缺乏十分有效的措施,其主要原因是对房颤发生、持续以及维持的病理生理机制还不完全清楚。近年来的研究发现心房电重构在房颤的发生、维持以及复发中起关键作用,而离子通道、特别是L-型钙通道和钾通道Kv4.3的表达改变可能是房颤电重构的真正分子基础。目前对于房颤刺激诱导离子通道表达改变的机制还不完全清楚。本研究拟利用快速起搏细胞模型,探讨快速起搏早期心房肌细胞离子通道表达改变的调控机制,为房颤的防治提供新的理论依据。研究方法:1.酶解法分离、培养大鼠心房肌细胞,并通过观察细胞形态、透射电镜观察超微结构以及免疫荧光检测α-actin的表达等方法鉴定细胞。2.利用培养的心房肌细胞建立快速电场起搏模型。3.利用免疫细胞化学染色、RT-PCR以及Western-blotting等方法检测快速起搏不同时间后L-型钙通道α1c和钾通道Kv4.3的表达变化。4.利用激光共聚焦显微镜检测不同条件下心房肌细胞游离钙荧光强度。5.给予快速起搏24 h后,利用免疫细胞化学和Western-blotting等方法检测ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、CaM、CaMKⅡ以及p-CREB等的表达。6.分别给予L-型钙通道、ERK、p38MAPM、CaM和CaMKⅡ特异性阻断剂或拮抗剂预处理后,给予快速电场起搏24 h,然后利用RT-PCR以及Western-blotting方法检测L-型钙通道α1c和钾通道Kv4.3的表达变化。7.构建CREB siRNA表达载体,了解其对CREB基因的沉默作用及其对离子通道重构的影响。研究结果:1.成功分离培养了大鼠心房肌细胞,经鉴定细胞活力、纯度能够满足实验需要。2.成功构建了快速电场起搏的细胞模型,MTT法检测发现细胞活性与起搏前无明显差异,透射电镜可观察到细胞空泡样改变等。