盐胁迫对发菜细胞生理生化特征的影响

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本课题旨在探究盐胁迫对发菜生理生化特性的影响变化,从而为发菜资源保护和抗逆机制的探究提供理论依据和数据支持。主要内容包括了发菜细胞形态、亚显微结构、生长状态、光合色素、多糖、蛋白质、脯氨酸等各项指标的响应变化,同时对盐胁迫诱导的发菜细胞膜脂过氧化损伤和相应的抗氧化酶活性变化进行了探讨,最后对盐胁迫下发菜细胞所合成的胞外多糖物质进行分离纯化并进行初步结构和理化性质鉴定。主要研究结果如下:1.盐胁迫下,发菜细胞形态发生显著变化,藻体正常链式逐步瓦解,藻丝体逐渐断裂成较短的藻殖段或裂为单个细胞,细胞呈现团聚生长,胞外多糖合成增多,粘液层增厚。胞内类囊体的扩增与重排带来了附着其上的光合粒子的增加及重新分布。包括羧酶体、藻青素、聚葡糖颗粒、异染质、聚-β-羟基丁酸(PHB)和气泡在内的细胞内含物也发生了相应变化。2.盐胁迫下,发菜细胞的正常生长受到抑制,盐浓度越高这种抑制作用越明显。在新的稳定增长趋势建立之前,细胞会出现一个初始生长停滞阶段。盐胁迫未影响细胞光合色素的组成,但抑制了叶绿素a与藻蓝素的合成。与此同时,类胡萝卜素合成增加。胞外多糖、胞内可溶性糖、脯氨酸、蛋白质等渗透调节物质大量积累。盐胁迫诱导的过氧化反应加剧,细胞膜通透性增加,丙二醛不断积累,抗过氧化酶防御系统在发菜抗氧化机制中发挥着重要作用。3.对盐胁迫后发菜胞外多糖进行浓缩,脱蛋白,醇析得到粗多糖,再经DEAE纤维素52离子交换层析得到2个多糖组分NFEPS-A和NFEPS-B。通过葡聚糖凝胶Sephadex G100对NFEPS-A进行进一步的分离纯化,得到不同分子量范围的2个峰,命名为NFEPS-A1和NFEPS-A2。聚丙烯酰胺电泳实验表明其均为单一纯品。4.冻干后的NFEPS-A2纯品呈白色粉末,可溶于水,不溶于有机溶剂。组分中不含淀粉,不具有较短侧链和较少分支。组分中不含有氨基酸或其他氨基化合物,也不含有还原性醛基或酮基。多糖的扫描电镜分析表明,NFEPS-A2具有多孔结构和粗糙的表面。紫外扫描显示,组分中不含有裸露或游离的核酸和蛋白质。红外光谱显示,该多糖存在有分子内以及分子间氢键,同时分子中存在C-H键伸缩振动和OH的变形振动,具有甘露吡喃糖的特征吸收,属于非硫化多糖。气相色谱-质谱联用分析得到该多糖的主要包括D-葡萄糖、D-果糖、D-木糖、D-半乳糖、阿拉伯糖、塔罗糖、阿洛糖等单糖。自由基清除活性实验表明,NFEPS-A2组分对羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O-2·)的清除效率达到了46.79%和40%。相较于正常生长的发菜胞外多糖均出现上升。
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