【摘 要】
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NAC（NAM、ATAF和CUC）转录因子家族与植物抵抗逆境和生长发育关系密切。沙冬青（Ammopiptanthus）是中国西北荒漠区特有的常绿阔叶强抗逆植物,有蒙古沙冬青（A.mongolicus）和新疆沙冬青（A.nanus）两个种。本研究利用酵母自激活体系对克隆自蒙古沙冬青的AmNAC2基因编码的蛋白进行了转录激活活性分析,并利用RT-q PCR技术对该基因进行了表达分析,同时构建了该物种A
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NAC（NAM、ATAF和CUC）转录因子家族与植物抵抗逆境和生长发育关系密切。沙冬青（Ammopiptanthus）是中国西北荒漠区特有的常绿阔叶强抗逆植物,有蒙古沙冬青（A.mongolicus）和新疆沙冬青（A.nanus）两个种。本研究利用酵母自激活体系对克隆自蒙古沙冬青的AmNAC2基因编码的蛋白进行了转录激活活性分析,并利用RT-q PCR技术对该基因进行了表达分析,同时构建了该物种AmNAC4基因的转基因杨树（山新杨）和水稻（中花11号）株系,并对转基因杨树的耐盐性进行了鉴定。主要研究结果如下:1.AmNAC2的完整蛋白产物（含292个氨基酸）及其C端区域（第159～292位氨基酸）具有转录激活活性,而其N端区域（第1～158位氨基酸）无此活性。2.在室内培养的蒙古沙冬青幼苗中,AmNAC2的表达水平受低温、高盐和高温胁迫的诱导迅速显著上调,而其在干旱胁迫下的表达上调较为迟缓。在野外生长蒙古沙冬青成株的嫩叶中,AmNAC2的表达量在秋季和冬季明显高于春、夏两季,而在春季野外植株的不同器官中,其表达量在根中最高,其次依次为叶片、嫩枝、未成熟果荚和花蕾。3.构建了AmNAC4的组成型表达载体p1302-35S-AmNAC4,经农杆菌介导法转化杨树无菌苗叶片,得到潮霉素抗性再生植株41株。经PCR和RT-q PCR检测,从中筛选到AmNAC4的转基因阳性株系7个、高表达株系3个。对转基因株系进行耐盐性鉴定,发现其在盐胁迫下的株高、鲜重和叶绿素含量均高于野生型对照,而电导率和花青素含量均低于后者,表明AmNAC4的组成型表达提高了转基因杨树的耐盐性。4.利用农杆菌（含植物表达载体p3300-35S-AmNAC4）介导法转化水稻愈伤组织,得到抗草胺磷的再生植株25株并获得其T1代种子。经PCR和RT-q PCR检测,从中筛选到AmNAC4的转基因阳性株系12个、高表达株系6个。本论文为探究AmNAC2和AmNAC4基因在抵抗逆境胁迫中的功能和利用价值提供了依据和实验材料。
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