【摘 要】
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该文在基因的高通量克隆表达技术方面,进行了以下几方面的研究工作：分别构建了大肠杆菌、酿酒酵母和毕赤酵母高通量克隆表达载体,它们都有含CpoⅠ和NotⅠ酶切位点的接头.经过T
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该文在基因的高通量克隆表达技术方面,进行了以下几方面的研究工作：分别构建了大肠杆菌、酿酒酵母和毕赤酵母高通量克隆表达载体,它们都有含CpoⅠ和NotⅠ酶切位点的接头.经过T<,4>DNA聚合酶修饰过的PCR产物能够高通量地定向克隆到上述表达载体上,使甘露聚糖酶基因在相应宿主中得到表达.创建了避免大肠杆菌操作的毕赤酵母克隆表达方法.该方法采用两轮PCR,构建线性表达盒式结构,直接转化毕赤酵母,能在一天内完成PCR扩增目的基因到转化毕赤酵母的全过程,无需经过大肠杆菌操作.将甘露聚糖酶基因通过PCR克隆到毕赤酵母表达载体pHBM322-1上,实现了在毕赤酵母GS115、KM71和SMD1168中的分泌表达.将8种重组毕赤酵母分别诱导产酶后,进行相关的酶学性质的研究.
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