羊膜包裹同种异体肌腱移植修复鸡趾屈肌腱缺损的实验研究

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目的:肌腱损伤是手外科领域较为常见的疾病,多为多发性外伤,常常需要肌腱移植修复缺损。同种异体肌腱因其来源充足,不会对患者造成副损伤,是理想的移植选择。羊膜为半透明薄膜,异体移植后不发生免疫排斥反应,且可分泌免疫抑制因子,抑制移植后炎性反应的发生。本次试验是利用羊膜包裹在同种异体肌腱周围,移植修复来亨鸡趾深屈肌腱缺损,评价其促进内源性愈合情况,预防肌腱粘连及抑制免疫排斥反应的有效性,为临床手外科领域同种异体移植肌腱,预防肌腱的粘连提供理论依据。方法:选用3个月月龄健康雄性来亨鸡96只,平均1.95±0.063kg。编号、标记后随机分为A组(羊膜同种异体肌腱包裹组)、B组(同种异体肌腱组)、C组(空白对照组)。本实验选用来亨鸡左足第Ⅲ、Ⅳ趾为肌腱损伤模型趾。于足趾跖侧面近侧指间关节到末节趾骨中段作“[”皮肤切口,长约3cm。切开皮肤,向侧方翻起皮瓣,锐性分离,暴露屈趾浅、深肌腱组织。于趾间关节伸直位,趾浅屈肌腱近侧腱系带的止点远测3mm处及其向远端1.5cm处两点锐性横断趾深屈肌腱。A、B两组每只来亨鸡取下的Ⅲ、Ⅳ趾深屈肌腱段进行一对一互换,仔细缝合肌腱。A组植入2.0cm×1.5cm面积的羊膜小片,环形包绕移植肌腱及其上下吻合端;B组单纯移植同种异体肌腱;C组在相同部位横断趾深屈肌腱后再缝合。术后来亨鸡第Ⅲ、Ⅳ趾手术部位敷料包扎,踝关节跖屈、跖趾关节屈曲为900、趾间关节伸直位石膏托、胶布固定。大体解剖观察:术后7d、14d、21d、28d在A组、B组、C组分别取6只来亨鸡,处死后立即沿原手术切口切开,观察腱周组织的病理性改变,移植的肌腱在吻合口处有无断裂,移植肌腱的色泽,肌腱的滑动性,肌腱愈合及粘连的情况。组织学观察:术后7d、21d在A组、B组、C组选取2只来亨鸡,原手术切口切开足趾,仔细沿腱鞘浅层及骨面锐性切取以两端肌腱吻合口中点为中心、长约2.0cm的趾深屈肌腱段。10%福尔马林固定,乙醇梯度脱水,二甲苯透明处理后浸蜡包埋、切片,分别进行HE和Masson染色,光镜下观察。透射电镜观察:术后14d、28d在A组、B组、C组选取2只来亨鸡沿原手术切口切开足趾,自趾深屈肌腱两端吻合部取1mm×1mm×1mm组织块, 3%戊二醛固定液及1%锇酸固定液逐步固定,在温度为2℃的冰箱内以乙醇、丙酮梯度脱水,将组织块用丙酮和812环氧树脂包埋,固化后超薄切片机切片,3%醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,置透射电镜下进行观察。生物力学测定:术后7d、14d、21d、28d、35d、42d每组取4只动物处死后,切取左足Ⅲ、Ⅳ趾的趾深屈肌腱行生物力学测试。①肌腱抗张断裂强度的测定:取出第Ⅲ趾趾深屈肌腱段,固定于生物力学试验机夹具上,满载荷量程设定为200N,以15mm/min的拉伸速度进行牵拉至肌腱吻合口处断裂,电脑运行测定程序并与试验机相连,同步测量并记录肌腱抗张断裂强度数据。②拉断肌腱粘连带功耗的测定:第Ⅳ趾将其自跖趾关节处离断,暴露出近端的趾深屈肌腱。在不影响其趾间关节活动下,固定住第Ⅳ趾的近节趾骨,肌腱固定在试验机夹具上进行牵拉,拉伸速度为15mm/min,满载荷量程设定为200N。肌腱滑动14.5mm后停止,得到拉力-位移曲线,曲线下的面积为功耗W1。恢复后再次牵拉14.5mm,得到功耗W2。拉断肌腱粘连带功耗(设定为W0):W0=W1-W2。数据进行统计学分析。结果:①大体和组织学观察:术后7d、14d、21d、28d结果显示C组较A组、B组充血、水肿及炎性反应小,炎性细胞的浸润范围更加局限。A、B组比较,A组的组织充血、水肿及炎症反应和侵润范围要弱于B组,胶原纤维的宽度及排列整齐性明显强于B组。术后21d、28d可见A组腱周粘连疏松,B、C组腱周粘连致密。②透视电镜观察:术后14d、28d结果显示C组成纤维细胞合成较A、B组旺盛,可见大量排列较规则的胶原纤维。A组成纤维细胞数量较B组多,粗面内质网丰富,新生的胶原纤维排列整齐、紧凑、粗大。③生物力学测定:㈠肌腱抗张断裂强度:术后各时间点,A、B组与C组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);术后7d、14d,A、B组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。其余各时间点A、B组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。㈡拉断粘连带功耗:术后各时间点,A组与B、C组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);术后28d、35d、42d,B、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。其余各时间点B、C组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:羊膜做为一种移植材料,不仅有分泌免疫抑制因子,抑制移植肌腱炎性反应发生的作用,还可以促进肌腱内源性愈合,有效预防肌腱粘连。因其可被组织吸收,不会在体内残留,为临床移植肌腱、预防术后粘连的研究提供了一个新的方向。
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