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背景:钙化性主动脉瓣疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是继冠心病和高血压之后的第三大心血管疾病,但临床缺乏有效防治药物,因此有必要开展CAVD发病机制研究以寻找早期干预方法。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)参与CAVD,但ROS的来源及其对钙化的调控作用需深入研究。NADPH氧化酶-2(NADPH oxidase-2,Nox2)是重要ROS来源,参与多种心血管疾病的发生和发展,然而Nox2在CAVD中作用尚不清楚,甚至缺乏关于Nox在正常主动脉瓣膜组织细胞表达的基本了解。目的:1阐明Nox主要亚型Nox2和Nox4在猪主动脉瓣膜组织和细胞的生理性表达;2检测Nox2在离体瓣膜间质细胞钙化过程和在体兔CAVD瓣膜中的水平变化;3明确Nox2抑制剂雷公藤红素对体外细胞钙化的影响和在体兔CAVD的保护作用。方法:1分离培养原代猪主动脉瓣膜间质细胞(Aortic valvular interstitial cells,AVIC)和内皮细胞(Endothelial cells,EC),分别利用RT-PCR、Western blot和免疫荧光等检测正常猪主动脉瓣膜和培养的AVIC及EC中Nox2和Nox4的表达情况;2建立AVIC细胞钙化模型,检测Nox2在细胞钙化前后的蛋白水平,观察雷公藤红素(10 n M,14天)对细胞钙化结节和钙化标识物的影响;3建立兔CAVD模型,并口服给予雷公藤红素治疗(20 mg/天,18周),通过超声心动图观察兔主动脉瓣膜钙化程度,以及通过RT-PCR和免疫组化等检测瓣膜Nox2水平及钙化情况。结果:1 Nox2和Nox4在正常猪主动脉瓣膜的根部高表达;Nox4在瓣膜EC中的含量较AVIC高,而Nox2在AVIC中表达更高;2 AVIC钙化过程中Nox2蛋白水平增加,Nox2活性抑制剂雷公藤红素可显著抑制AVIC钙化;3成功建立兔CAVD模型,Nox2在钙化的瓣膜中水平升高。口服雷公藤红素可在一定程度上减轻兔CAVD的严重程度。结论:1 Nox2和Nox4在主动脉瓣膜中的表达是组织细胞特异性的;2在瓣膜钙化过程中Nox2表达增加,Nox2抑制剂雷公藤红素可以在一定程度上抑制AVIC钙化和兔CAVD的发展。