【摘 要】
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目的:探讨黄杞苷对脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应、氧化应激的干预效果和分子机制以及对炎症微环境介导的肝星状细胞HSC-T6增殖迁移、氧化应激、ECM生成的干预效果和分子机制。方法:第一部分:采用LPS诱导RAW264.7细胞建立巨噬细胞炎症模型,分为对照组、LPS组、LPS+黄杞苷组（100μM、200μM、400μM、600μM、800μM）,采用MTT筛选黄杞苷的有效干
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目的:探讨黄杞苷对脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应、氧化应激的干预效果和分子机制以及对炎症微环境介导的肝星状细胞HSC-T6增殖迁移、氧化应激、ECM生成的干预效果和分子机制。方法:第一部分:采用LPS诱导RAW264.7细胞建立巨噬细胞炎症模型,分为对照组、LPS组、LPS+黄杞苷组（100μM、200μM、400μM、600μM、800μM）,采用MTT筛选黄杞苷的有效干预浓度、分析各组增殖率变化;ELISA检测培养上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）;检测各组细胞氧化应激产物ROS、超氧化物（O2.-）、一氧化氮（NO）生成;Western blot检测各组细胞IκBα、p65、p-p65蛋白表达水平。第二部分:将LPS诱导RAW264.7细胞后的培养上清制备条件培养基（CM）刺激HSC-T6细胞,分为对照组、CM组、CM+200μM黄杞苷组、CM+400μM黄杞苷组、CM+800μM黄杞苷组,采用MTT检测各组细胞增殖率;划痕实验检测不同时间各组细胞迁移率;检测各组细胞氧化应激产物ROS、O2.-及NO的生成;Western blot检测各组细胞I型胶原蛋白（Collagen I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及NF-κB通路中IκBα、p65、p-p65蛋白表达水平。结果:第一部分:MTT结果显示,100μM、200μM、400μM、600μM、800μM黄杞苷干预后可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖,400μM为黄杞苷作用最有效浓度,细胞生长明显抑制,密度显著减少;ELISA结果显示,400μM黄杞苷可降低LPS诱导的RAW264.7细胞上清中的TNF-α和IL-6含量;氧化应激产物检测显示,400μM黄杞苷可减少LPS诱导的RAW264.7细胞产生ROS、O2.-及NO生成;Western blot结果表明,LPS可下调RAW264.7细胞IκBα蛋白水平,上调p65、p-p65蛋白水平,而400μM黄杞苷干预后RAW264.7细胞IκBα蛋白水平上调,p65蛋白、p-p65蛋白水平下调。第二部分:MTT结果显示400μM和800μM黄杞苷干预均使炎症微环境介导的HSC-T6细胞增殖抑制;划痕实验表明:400μM和800μM黄杞苷干预12h后对炎症微环境介导的HSC-T6细胞迁移抑制作用不明显,而干预24h后对炎症微环境介导的HSC-T6细胞迁移抑制作用明显;氧化应激产物检测显示,400μM和800μM黄杞苷干预可抑制炎症微环境介导的HSC-T6细胞产生ROS、O2.-及NO;Western blot结果表明,黄杞苷干预后能下调炎症微环境介导的HSC-T6细胞中α-SMA和Collagen I蛋白水平,使NF-κB通路中IκBα蛋白水平上调、p65、p-p65蛋白水平下调。结论:1.LPS可诱导RAW264.7细胞增殖并发生炎性反应和氧化应激,进而构建炎症细胞模型,炎症微环境可进一步介导HSC-T6细胞增殖、迁移,使氧化应激产物和ECM产生增加,说明炎症和氧化应激促进肝纤维化进程。2.黄杞苷能有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖、炎症反应和氧化应激,还能抑制炎症微环境介导的HSC-T6细胞增殖、迁移、氧化应激和ECM产生,说明黄杞苷具有抗炎、抗氧化、抗肝纤维化的作用。3.黄杞苷对RAW264.7细胞和HSC-T6细胞增殖、炎症反应和氧化应激的抑制作用可能与干预ROS/RNS-NF-κB信号通路有关。
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