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目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,将携带表皮生长因子受体(EGFR)同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞,观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化。方法:根据RNA干扰原理,体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰片段,即h-EGFR,以pGensil-1为载体,构建重组质粒pGensil-1-EGFR(简称ds-EGFR),以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞,经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞,将所挑选出的单克隆细胞大量培养后与A549细胞对照组和转染空白质粒的阴性对照组进行比较,并加入不同浓度顺铂(40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml),采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞活力,绘制生长曲线,并计算细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化,观察RNAi对A549细胞抑制作用及是否与顺铂有协同作用.结果:1. MTT检测结果显示,从第二天起ds–EGFR组生长缓慢,48h、72h、96h的吸光度分别为0.741±0.010、0.860±0.054、0.999±0.192,与对照组、阴性对照组相比,有统计学差异(P<0.05);ds–EGFR联合不同浓度(40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml)的顺铂与等浓度顺铂相比,作用24h后,其抑制率分别提高了7.8%、30.70%、34.42%,提示ds-EGFR联合顺铂或单独顺铂对A549细胞均有抑制作用,且随着顺铂浓度的增加和时间的延长抑制作用增强。2.细胞周期分析显示,ds–EGFR组G0/G1细胞百分比较对照组增加了13.84%,较阴性对照组增加了14.65%,进入S期的细胞百分比较对照组减少了19.10%,较阴性对照组减少了18.68%;40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml顺铂处理细胞24h后,与对照组相比,凋亡率明显增高(P<0.05),其凋亡率分别为34.40±1.21,16.30±1.19,7.22±1.25, ds–EGFR联合不同浓度顺铂(40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml)作用A549细胞24h后其凋亡率分别为37.12±1.99,17.93±1.13 ,10.42±1.45。ds–EGFR联合顺铂与等浓度顺铂凋亡率比较有统计学差异(P<0.05)。结论:ds-EGFR可有效抑制A549细胞生长,使细胞阻滞在G0-G1期,并能提高细胞对顺铂的敏感性,且随着顺铂浓度的增加,其抑制率增强,提示靶向EGFR的RNA干扰技术可作为NSCLC基因治疗的一种手段,且与顺铂联用两者具有协同效应。