新型鸭呼肠孤病毒病是一种以鸭脾坏死为特征的,由新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）引起的禽类传染病。临床上表现为肝脏表面出现大量针尖大小的白色坏死灶和大量出血点,脾脏肿大,有暗红色的出血症状,表面有许多灰白色的坏死点,有的汇聚在一起,形成花斑状。心脏、肾脏、法氏囊等有时也能见到出血病变。病原可通过消化道和呼吸道感染,病情发展迅速,死亡率较高。研究表明,新型鸭呼肠孤病毒是一种RNA病毒,该病毒分类为呼肠孤病毒科（Reovirdae）正呼肠孤病毒属（Orthoreovirus）。由于该病毒是多节段的双链RNA,容易产生基因突变,从而极大的提高了产生新型致病毒株的可能性,进而给水禽养殖业带来新的危害。因此检测对于NDRV的防控以及净化具有非常重要的意义。ELISA检测方法因具有灵敏度高、操作方便简单的特点所以成为了目前常用的一种快速准确的检测方法。本研究通过对NDRV的σC基因进行原核表达,获得了符合表达预期的重组蛋白,并以此为抗原建立了NDRV的间接ELISA检测方法,之后将建立的间接ELISA方法初步应用于血清学调查。具体研究结果如下:从脾脏坏死的病鸭中提取出NDRV总RNA,采用PCR方法扩增出NDRV的σC基因序列,将其克隆至p MD18-T载体上,将其命名为p MD18T-σC;再将p MD18T-σC载体上的NDRV的σC基因序列酶切回收连接到p ET-32a表达载体,将其命名为p ET-32a-σC。用p ET-32a-σC表达载体转化BL21感受态细胞,以增大重组表达蛋白的表达量。将获得的纯化蛋白进行Western blot分析。采用i ELISA技术,将所得到的σC重组蛋白作为包被抗原,检测鸭血清中NDRV抗体,以此做为检测NDRV病毒的一种方式。之后对建立的i ELISA方法进行条件的优化,确定所建立的i ELISA检测方法的最佳条件。用建立的i ELISA方法对鹅细小病毒（GPV）、新型鹅细小病毒（NGPV）、番鸭细小病毒（MDPV）、I型鸭肝炎病毒（DHAV-1）、Ⅲ型鸭肝炎病毒（DHAV-3）及NDRV阴阳性血清进行检测,结果发现其他血清的检测数值远小于NDRV阳性血清,证明建立的i ELISA方法对检测NDRV血清抗体具有极高的特异性。利用已建立的i ELISA方法,对采集的NDRV人工攻毒发病鸭、灭活苗免疫鸭10天的血清和耐过30天鸭血清样品的检测,结果表明,攻毒发病鸭的ELISA阳性率高达100%;灭活苗免疫鸭10天后采血进行检测,ELISA阳性率为100%;攻毒耐过30天的鸭,ELISA检测结果的阳性率与之前免疫后10天的结果一致。以上结果表明,利用所建立的i ELISA方法进行NDRV抗体的血清学调查是切实可行的。通过对临床样品的检测进一步验证建立的i ELISA的可行性,对临床表观健康种鸭100份血清进行检测,由结果可见σC-ELISA的阳性率都在80%以上;对疫苗免疫的种鸭100份血清进行检测,由结果表明建立的ELISA方法检测的阳性率很高;对临床表观健康肉鸭的100份血清进行检测,由结果表明σC-ELISA的阳性率高达78%;对临床发病的100份鸭血清进行检测,由结果可见检出率高达100%,对山东省两养殖场随机送检的200份鸭血清进行检测,σC-ELISA的阳性率为69.5%,以上数据证明我国鸭群中NDRV感染率较高,极易引发免疫抑制,引起大规模继发感染,造成巨大的经济损失,因此对新型鸭呼肠孤病毒的研究仍迫在眉睫。本研究为进一步了解新型鸭呼肠孤病毒病的流行状况,做出了一定的贡献,提供了一种快速、简便的检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为后续的研究打下了一定的技术基础。