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目的:异位妊娠(EP)是妇科常见的急腹症之一,也是孕早期患者死亡的主要原因。早诊断、早治疗对患者治疗方案的选择及减少并发症的发生有着极为重要的意义。本研究旨在从细胞的凋亡与增殖及血管生成等角度,利用免疫组化及图像分析技术研究Bcl-2、Ki-67、VEGF在不同类型输卵管妊娠(包括流产型、破裂型、及存活型)的组织中表达的各自特点,探讨异位妊娠的发病机制;并采用ELISA技术分析输卵管妊娠患者组内和输卵管妊娠、先兆流产及正常宫内早孕患者组间血清β-HCG、VEGF表达水平的差异及相关性。为进一步研究输卵管妊娠的发生和发展提供更广泛的理论依据;并对输卵管妊娠的早期诊断、诊断精确度的提高及保守治疗效果的判断提供帮助。
方法:资料来源:选自2003.12-2005.06在河北医科大学第二医院妇科住院的输卵管妊娠并手术切除输卵管病人组60例,其中包括存活型、流产型、破裂型各20例;正常早孕组20例;先兆流产组20例。研究对象各组平素月经规律,平均年龄、平均停经天数、孕产次等均无统计学差异。凡有全身急慢性炎症、子宫内膜异位症、结核、使用促排卵药物者除外。输卵管妊娠及类型的诊断标准:入院检查可疑者,全部由手术和术后病理检查确诊。标本采集:各组患者均在手术或治疗前抽取静脉血5毫升,2000转/分,离心15分钟取上清液,置-70℃冰箱待测β-HCG和VEGF。输卵管妊娠患者术后取胚胎着床部输卵管组织标本1×1cm大小,人流及自然流产患者各取少量绒毛和蜕膜组织,生理盐水冲洗干净,经4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、4um连续切片备用。(1)依据输卵管组织切片常规HE染色后的组织学结果,筛选出伴有滋养细胞侵润的组织切片,进行免疫组化检测。(2)采用免疫组化S-P法检测各组组织中VEGF、Bcl-2及Ki-67的表达特点并进行比较。(3)采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测输卵管妊娠、正常宫内早孕和先兆流产患者血清β-HCG和VEGF的浓度,并进行比较。数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,显著性水准为P<0.05。
结论:
1.Ki-67与Bcl-2在存活型输卵管妊娠及正常妊娠组织中表达增强,而在流产型输卵管妊娠和先兆流产中表达减弱,提示:细胞增殖与凋亡可能在孕卵发育过程中起着重要作用。输卵管妊娠的发生与发展依赖于滋养细胞的增殖和凋亡之间的平衡,输卵管妊娠破裂不仅是滋养细胞过度增殖的结果,同时也通过抑制凋亡使滋养细胞生存期延长、活性增强,即二者共同作用的结果。
2.VEGF在早孕期绒毛间质细胞、蜕膜细胞和合体滋养细胞中均有表达,但表达不均衡(以血管芽处浓度较高)以及VEGF在存活型输卵管妊娠中表达的增强,提示滋养叶细胞产生的VEGF不仅有促进胎盘血管网络发育,维持母儿间营养交换的积极作用;也具有促进绒毛外滋养细胞过度增殖而导致妊娠输卵管破裂的负面作用。
3.输卵管妊娠组血清VEGF水平明显高于先兆流产组和正常宫内早孕组。提示:VEGF的分泌与滋养细胞增殖和胎盘的生长有关;局部组织缺氧的程度与VEGF的表达密切相关,缺氧可引起VEGF表达的增高。血清VEGF是早期诊断输卵管妊娠的潜在标志物。
4.血清VEGF浓度在输卵管妊娠存活型明显高于流产型和破裂型,而β-HCG水平在三种类型之间并无显著性差别;VEGF与β-HCG呈正相关关系。提示:VEGF的表达间接的反应了滋养细胞的活性,血清VEGF浓度可以作为β-HCG连续检测的一种补偿有助于对输卵管妊娠类型的鉴别诊断,并可以作为一项血清学指标对输卵管破裂进行预测。