论文部分内容阅读
目的： 1.研究补肾调冲方对雷公藤制剂致卵巢早衰(Premature ovarian failure，POF)大鼠卵巢组织形态及其相关因子IFN-γ，INHB蛋白及基因表达的影响。 2.观察补肾调冲方对POF大鼠的药效学作用和预防作用，为中医药治疗POF提供实验数据。 方法： 健康雌性SD大鼠80只，随机分为空白组，雷公藤组(模型组)，西药组，补肾调冲方高、中剂量预防组(补肾调冲方预防组)，补肾调冲方高、中、低剂量治疗组（补肾调冲方治疗组)，共8组，每组10只。空白组：自由进食饮水。除空白组外，其余各组都采用雷公藤多苷片造模。模型组用雷公藤多苷片灌胃法建立大鼠卵巢早衰动物模型。补肾调冲方预防组在造模的同时用不同剂量的补肾调冲方灌胃给药；补肾调冲方治疗组在造模结束后用补肾调冲方不同剂量灌胃给药。西药组以结合雌激素水溶液灌胃。实验结束后，监测大鼠血清激素变化、卵巢组织形态学变化、卵巢相关细胞因子IFN-γ，INHB蛋白及基因表达水平，研究补肾调冲方对POF大鼠的药效学作用和预防作用。 结果： 1.各组大鼠动情周期变化：空白组、补肾调冲方低剂量治疗组、西药组动情周期规律，4-5d/次。其余各组动情周期延长，其中补肾调冲方高剂量治疗组、模型组动情周期为7-8d/次，补肾调冲方中剂量治疗组和补肾调冲方中剂量预防组动情周期均为5-6d/次。补肾调冲方预防组高剂量动情周期为6-7d/次。 2.各组大鼠血清激素水平变化：（1）补肾调冲方预防各组：补肾调冲方预防各组与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组血清FSH、LH与模型组比较水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；E2、INHB水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）补肾调冲方治疗各组：补肾调冲方治疗各组与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。给药组血清FSH、LH与模型组比较水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；E2、INHB水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。补肾调冲方治疗中、高剂量组和西药组与其他各给药组差异有统计学意义（P<0.05）。 3.（1）光镜下观察各组大鼠卵巢组织形态的变化：空白组可见各期卵泡，卵巢体积增大，卵泡生长十分活跃，颗粒细胞层多，卵泡液含量丰富；黄体发育良好，体积较大，黄体细胞数量多。模型组可见卵巢体萎缩，体积变小，处于生长期的卵泡数减少，部分被纤维组织所替代；黄体数量减少，卵泡闭锁多。而补肾调冲方低剂量治疗组、补肾调冲方高剂量预防组、西药组下可见各期卵泡生长旺盛，颗粒细胞多，卵泡液含量丰富；黄体发育良好，容积较大，黄体细胞丰富。 （2）电镜下观察各组大鼠卵巢组织形态的变化：空白组可见卵巢组织结构清晰，层次多样，卵泡细胞排列整齐，细胞器丰富多样，形态及结构正常。模型组可见模糊不清的透明带，细胞排列杂乱，大小不等，细胞器数量减少且变形，胞浆基质致密，核染色体凝集，组织呈明显的凝集性损伤。补肾调冲方预防各组均有不同程度的损伤，超微结构差于补肾调冲方治疗各剂量及西药组。补肾调冲方中剂量预防组好于补肾调冲方高剂量预防组，其疗效与补肾调冲方高剂量治疗相似。 4.各组大鼠卵巢组织中细胞因子IFN-γ、INHB蛋白及基因表达水平的变化: （1）补肾调冲方预防各组：各给药组的IFN-γ蛋白及mRNA的表达与空白组比较升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组的INHB蛋白及mRNA的表达与空白组比较降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。各给药组的IFN-γ蛋白及mRNA的表达与模型组比较降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组的INHB蛋白及mRNA的表达与模型组比较升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。 （2）补肾调冲方治疗各组：各给药组的IFN-γ蛋白及mRNA的表达与空白组比较升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组的INHB蛋白及mRNA的表达与空白组比较降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组的IFN-γ蛋白及mRNA的表达与模型组比较降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。各给药组的INHB蛋白及mRNA的表达与模型组比较升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论： 1.补肾调冲方对卵巢早衰有一定的保护作用，其作用机制可能是补肾调冲方能够调节卵巢激素水平，降低FSH、LH水平，升高E2水平。 2.补肾调冲方可通过上调INHB蛋白及基因的表达，下调IFN-γ蛋白及基因的表达，抑制卵巢颗粒细胞凋亡，减少卵泡闭锁，改善黄体功能，从而促进卵巢生理功能的恢复。3.光镜及电镜下可见补肾调冲方预防各组与补肾调冲方治疗各组的各级卵泡发育、黄体发育及超微结构明显好于模型组。因结构决定功能，卵巢结构的改善势必能促使其功能的恢复。