低聚异麦芽糖因其具有独特的生理功能而广受重视。α-葡萄糖苷酶是生产低聚异麦芽糖的关键酶,不同α-葡萄糖苷酶的酶学性质及对底物的转苷作用均存在一定差异,本文以8株重组甲醇毕赤酵母菌株P. pastoris A5、P. pastoris A24、P. pastoris A45、 P. pastoris A58、P. pastoris B74、 P. pastoris B87、P.pastoris C12、P. pastoris C35为研究对象,分析了8株菌所产的酶Glu-A5、Glu-A24、Glu-A45、Glu-A58、Glu-B74、Glu-B87、 Glu-C12和Glu-C35的酶学性质,以及对麦芽糖底物的转苷作用产物,具体研究内容如下。首先确定了α-葡萄糖苷酶的酶活测定方法。通过生物传感仪测定α-葡萄糖苷酶水解底物后葡萄糖的生成量,直接反映α-葡萄糖苷酶酶活力,测定方法更加简便。然后对8株毕赤酵母工程菌菌株富集培养24 h (BMGY)和甲醇诱导培养120 h(BMMY),离心取上清即为粗酶液。比较了硫酸铵沉淀法、丙酮沉淀法、无水乙醇沉淀法对粗酶液的浓缩效果,确定无水乙醇沉淀法为α-葡萄糖苷酶粗酶液浓缩沉淀方法,浓缩条件为无水乙醇与粗酶液比例为2：1(V:V),浓缩温度为4℃,酶活回收率达到了88%。对浓缩后的酶液进行酶学性质分析。8种α-葡萄糖苷酶的最适温度均为50℃,最适pH在5-6之间。K+、Ca2+、Mg2+对其都有激活作用,Fe2+、Cu2++、Al3+、Fe3+则对其都有抑制作用,8种α-葡萄糖苷酶的酶学性质相差不大。优化了8种酶的转苷条件,最适转苷条件为温度50℃-55℃,pH为5.0-5.5,转苷最适时间为25-30 h,最适加酶量为36 U/mL-42 U/mL在每种酶的最适转苷条件下,进行转苷反应,HPLC分析转苷结果中各糖的含量和比例,结果表明Glu-A5、Glu-A24、Glu-A45、Glu-A58作用于底物麦芽糖后,潘糖生成率较高,达到21.19%-31.41%；Glu-C12和Glu-C35异麦芽三糖的量较高,生成率为16.71%-23.17%；而Glu-B74和Glu-B87转苷活性较低,3种低聚糖的生成率均低于11%。