【摘 要】
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目的:通过建立缺氧诱导的肾小管上皮细胞（enal tubular epithelial Cell,RTEC）坏死性凋亡模型,运用激动剂罗格列酮上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors,PPARγ）表达,探讨PPARγ在缺氧诱导的RTEC坏死性凋亡中的作用。方法:将大鼠源性RTEC细胞株（NRK-52E）培养传代后,随
【基金项目】
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项目名称:PPARγ受体在缺氧性 RTEC 损伤中的作用及机制研究,项目合同编号:2017GXNSFDA198008,项目来源:广西自然科学基金,项目起止时间:2017.09.30-2021.09.29
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目的:通过建立缺氧诱导的肾小管上皮细胞（enal tubular epithelial Cell,RTEC）坏死性凋亡模型,运用激动剂罗格列酮上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors,PPARγ）表达,探讨PPARγ在缺氧诱导的RTEC坏死性凋亡中的作用。方法:将大鼠源性RTEC细胞株（NRK-52E）培养传代后,随机分为正常对照组、缺氧模型组和罗格列酮组。正常对照组常规培养,无特殊处理;罗格列酮组中加入罗格列酮并使其浓度为15μmol/L;将缺氧模型组、罗格列酮组放入缺氧小室中（充灌95%N2和5%CO2的混合缺氧气体）密封48小时建立缺氧诱导的RTEC坏死性凋亡模型。采用光学倒置显微镜观察各组RTEC的形态变化,应用透射电镜观察各组细胞的形态及细胞坏死性凋亡情况。采用实时荧光定量PCR（Reverse transcription polymerase chain reaction,Real-time-PCR）检测细胞PPARγ、受体交互作用蛋白（receptor interaction protein,RIP）1及RIP3的m RNA表达,Western blotting法检测细胞PPARγ、RIP1及RIP3的蛋白表达。结果:1.光镜下可见正常组RTEC胞体饱满,形态为椭圆形,呈铺路石样排列,细胞间隙适中;与正常对照组相比,光镜下缺氧模型组、罗格列酮组的细胞形态狭长,细胞密度明显减少,细胞碎片增多,且胞体萎缩,细胞间隙增宽;与缺氧模型组相比,罗格列酮组的细胞密度较之明显增高,细胞碎片明显减少。2.透射电镜下缺氧模型组、罗格列酮组的细胞均出现明显的坏死性凋亡;与缺氧模型组相比,罗格列酮组的细胞坏死性凋亡较之显著减轻。3.与正常对照组相比,缺氧模型组、罗格列酮组细胞中PPARγ的m RNA及蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;与缺氧模型组相比,罗格列酮组细胞中PPARγ的m RNA及其蛋白表达均显著增高（均P<0.05）。4.与正常对照组相比,缺氧模型组、罗格列酮组的细胞中RIP1、RIP3的m RNA及其蛋白表达均显著增高（均P<0.05）;与缺氧模型组相比,罗格列酮组的细胞中RIP1、RIP3的m RNA及其蛋白表达均显著降低（均P<0.05）。5.相关性分析:在缺氧诱导RTEC坏死性凋亡中,PPARγ的m RNA表达与RIP1、RIP3的m RNA表达均呈显著负相关（r=-0.568、-0.518,均P<0.05）。PPARγ的蛋白表达与RIP1、RIP3的蛋白表达均呈显著负相关（r=-0.608、-0.317,均P<0.05）。结论:在缺氧诱导的RTEC坏死性凋亡中,PPARγ表达显著降低并参与RTEC坏死性凋亡;上调PPARγ的表达可以减轻缺氧诱导的RETC坏死性凋亡。
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