目的:本研究通过混其勒和混其勒-7的急性毒性试验、蓄积毒性试验、亚急性毒性试验,采用代谢组学和16Sr RNA V3-V4高变区测序法,明确混其勒和混其勒-7毒性规律及机理,为混其勒-7的安全合理用药奠定实验依据。方法:1.急性毒性试验:将昆明小鼠随机分为混其勒和混其勒-7各5组。采用一次性染毒方法,详细记录中毒表现及动物死亡数量。计算半数致死量LD50。2.蓄积毒性试验:将昆明小鼠随机分为混其勒组、混其勒-7组和正常对照组。以4d为1个阶段,首次给药剂量为0.1LD50,其他阶段给药剂量依次递增为1.5倍,直至该组动物死亡一半为止。记录各阶段动物死亡情况并计算蓄积系数。同时计算脏器指数和相应生化指标。3.亚急性毒性试验:将SD大鼠随机分为正常对照组、混其勒高剂量（0.1029g/kg）、低剂量（0.0514g/kg）和混其勒-7高剂量（0.7886g/kg）、低剂量（0.3943g/kg）共5组,各给药组大鼠染毒4周。检测血清和肝肾组织相关指标;计算脏器指数;并进行肝肾组织病理学检查。4.亚急性毒性机理分析:利用UPLC-LC-MS分析方法对血清和肝肾组织进行非靶向代谢物分析;取各组的大鼠粪便,以16Sr RNA V3-V4高变区进行测序。探讨代谢产物和肠道菌群对混其勒和混其勒-7肝肾毒性的影响。结果:1.急性毒性试验结果显示,混其勒和混其勒-7的半数致死量(LD50)分别为176.018mg/kg和1235.877mg/kg。2.蓄积毒性试验结果显示,混其勒和混其勒-7的蓄积系数均为K>5,分级均为弱蓄积。与正常对照组比较,混其勒组的肝肾指数明显升高,血清ALT和AST的含量明显升高,UREAL、GREP含量显著降低,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;混其勒-7组的肝脾指数明显升高,AST和CREP的含量明显升高,UREAL含量明显降低,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。3.亚急性毒性试验结果显示,（1）对脏器指数影响:与正常对照组比较,混其勒高和低组肝脏、肾、脾和心脏指数明显升高;混其勒-7高剂量组肾脏指数明显升高,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（2）对肝肾功能指标的影响:与正常对照组比较,混其勒高、低剂量组的ALT含量升高,低剂量组的AST含量升高,UREAL和GLU的含量降低,CREP含量降低;混其勒-7高剂量组的AST、ALT、CREP含量升高,高、低剂量组的GLU含量降低,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（3）对血清氧化反应的影响:与正常对照组比较,混其勒高、低剂量组的LDH含量升高,低剂量组的GPX含量升高;混其勒-7高剂量组的GPX含量升高,高、低剂量组的ADH含量降低,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（4）对血清炎症因子的影响:与正常对照组比较,混其勒高剂量组的IL-1含量升高,低剂量组的IL-6和TNF-α含量升高;混其勒-7高、低剂量组的TNF-α含量升高,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（5）对肝组织氧化反应和炎症因子的影响:与正常对照组比较,混其勒高剂量组的LDH含量升高,低剂量组的GSH-PX含量降低;混其勒-7高、低剂量组的IL-1含量升高,高剂量组的ALDH含量升高,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（6）对肾组织中氧化反应和炎症因子的影响:与正常对照组比较,混其勒低剂量组的ADH和IL-6含量升高;混其勒-7高、低剂量租的ADH和IL-6含量升高,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。（7）对肝肾组织病理变化的观察:混其勒组肝组织可见少量的肝细胞轻度空泡变性,胞质疏松淡染,可见大小不一的水泡。肾组织可见少量肾小管管腔可见嗜酸性物质;混其勒-7组肝组织肝小叶结构清晰,呈放射状排列的肝细胞索和肝血窦,肝细胞圆润、饱满,肝板排列规则、整齐,未见明显的炎性改变。肾组织可见少量肾小管管腔可见嗜酸性物质。4.亚急性毒性机制结果显示,（1）对血清、肝和肾组织代谢产物的影响:（1）对血清代谢产物的影响:与正常对照组比较,混其勒组共有2个差异代谢物,为尿素含量升高、肌酐含量降低;混其勒-7组共有11个差异代谢物,尿素和肉碱的含量升高,脯氨酸、烟酰胺、L-焦谷氨酸、谷氨酰胺、左旋肉碱、乙酰肉碱的含量降低。（2）对肝组织代谢产物的影响:与正常对照组比较,混其勒组共有8个差异代谢物,单油精和华蟾蜍精的含量升高,β-龙胆二糖、D-（+）-半乳糖、果糖、海藻糖、帕拉金糖的含量降低;混其勒-7组共有3个差异代谢物,D-别异亮氨酸的含量升高,帕拉金糖的含量降低。（3）对肾组织代谢产物影响:与正常对照组比较,混其勒组有2个差异代谢物,为左旋谷氨酸的含量升高,次黄嘌呤核苷的含量显著降低;混其勒-7组共共有3个差异代谢物,为L-谷氨酸的含量显著升高,L-天冬酰胺和天冬氨酸盐的含量显著降低。（2）对肠道菌群的影响:与正常对照组比较,混其勒组共有梭菌目、螺旋杆菌属、乳球菌科、示波螺旋属、粪球菌属、变形菌属、孢子菌属、平球菌科、脱硫弧菌属、嗜双胞菌属、瘤胃球菌属、梭状芽孢杆菌属、放线菌属、双歧杆菌目、芽孢杆菌科等16个差异肠道菌群;混其勒-7组共有副普雷沃菌、气球菌、Anaerofustis菌、真细菌酶、棒状杆菌科、棒状杆菌属、放线菌目、放线菌属等8个差异肠道菌群。结论:1.混其勒和混其勒-7均有急性毒性,毒性级别均为中等毒性。2.混其勒和混其勒-7对肝肾均有弱蓄积性毒性。3.混其勒和混其勒-7对肝肾脏均有亚急性毒性,毒性与用药量有直接关系。即与临床给药量对应的低剂量组出现毒性,且毒性相对较小,高剂量组毒性较大。这也说明了临床使用混其勒-7时不能持续超过28天。4.混其勒和混其勒-7的亚急性肝肾毒性是由于肠道梭菌、放线菌、气球菌等细菌的活性发生紊乱,导致血清、肝肾组织中29个代谢产物发生差异变化。初步认为以上差异肠道菌群和代谢产物是混其勒和混其勒-7的肝肾脏指标、脏器指数、炎症因子和肝肾脏细胞发生病变的机理。