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自身免疫性肝炎是由于自身免疫系统紊乱,导致免疫细胞直接或者间接攻击自身肝脏实质细胞,造成肝脏损伤的临床疾病,但是其致病机理仍然不清楚。现有的治疗手段主要是免疫抑制治疗,当病情恶化为肝衰竭时,只能进行肝脏移植;免疫抑制治疗能够使80%的病人病情得到缓解,但是经常伴随有严重的副作用以及停药复发,另外15%～20%的病人对于免疫抑制治疗不敏感,治疗效果难以控制。目前已有的动物模型都是免疫抑制剂敏感模型,本研究建立了一种对免疫抑制剂不敏感的AAGL诱导肝炎模型,对肝炎机理研究和药物筛选有重要意义。主要的研究内容如下:1.AAGL诱导的肝炎与经典的ConA模型不同,是新的AIH-like模型小鼠尾静脉注射杨树菇半乳糖凝集素AAGL（又称AAL）,可以诱导急性肝炎;AAGL诱导的肝炎具有浓度和时间依赖效应;AAGL对原代肝实质细胞没有杀伤作用,不能诱导裸鼠肝炎,说明AAGL诱导的肝炎与免疫有关。免疫抑制剂强的松龙或者环孢素处理能够抑制ConA诱导的肝炎,但不能缓解AAGL诱导的肝炎,说明AAGL诱导的肝炎模型是新的（类）自身免疫性肝炎模型。2.多种细胞参与AAGL诱导的肝炎,没有单一主导的细胞亚群流式检测结果表明,AAGL处理后T细胞最先聚集在肝脏,随后NKT,NK细胞也在肝脏聚集,激活的淋巴细胞（IFN-γ+细胞）数量也大量增加。anti-CD4或者anti-CD8抗体预处理小鼠,加剧了AAGL诱导的肝炎,AAGL仍然能够诱导CD1d-/-小鼠肝炎,Anti-ASGM1抗体封闭NK细胞后,AAGL诱导的肝炎有缓解趋势,但不能有效抑制。这些研究结果说明,多种细胞在AAGL诱导的肝炎模型中起作用（Teff,Tregs,NKT,NK）,但没有鉴定到单一主导引起肝炎的细胞亚群,AAGL诱导肝炎的机理比ConA更复杂。3.细胞因子IL-1β和IL-10在AAGL诱导肝炎中具有重要作用利用高通量测序检测小鼠肝脏转录组中基因表达的变化,发现IL-1β、IL-10在AAGL组中表达量明显高于ConA组;Anti-IL-1β抗体预处理小鼠能够缓解AAGL诱导的肝炎,免疫组化显示anti-IL-1β抗体预处理使得AAGL诱导的T/NKT细胞在肝脏的聚集明显减少,说明在该模型中IL-1β通过招募T/NKT细胞来促进肝损伤。流式结果显示,AAGL处理导致IL-10+淋巴细胞在肝脏和脾脏淋巴细胞中的比率都升高;western blot结果显示,肝脏和脾脏中Foxp3的表达量都有升高,说明在AAGL模型中Tregs被激活,参与抑制AAGL-AIH。4.醋酸格拉替雷（GA）能够缓解AAGL诱导的肝炎GA预处理可以缓解AAGL诱导的肝炎,流式结果显示GA预处理使AAGL处理小鼠脾脏Tregs的比率显著升高,q PCR显示GA预处理使AAGL处理小鼠肝脏IL-1Ra表达量也显著升高,T/NKT细胞在肝脏的聚集比率减少,说明GA可能通过提高Tregs的比例,或通过诱导IL-1Ra的表达,抑制IL-1β活性,从而缓解AAGL诱导的肝炎;这些结果表明,增加肝脏内的Tregs可能是治疗对免疫抑制剂不敏感AIH病人的有效策略,GA也许能作为治疗该类病人的候选药物。5.AAGL/ConA结合淋巴细胞表面的糖蛋白受体鉴定乳糖封闭AAGL的CRD区域时,其诱导肝炎的活性消失;重组的AAGL仍能诱导肝炎而完全丧失糖结合活性的突变体AAGL-63不能诱导肝炎,这些结果表明,AAGL诱导的肝炎与其糖结合活性密切相关。为进一步检测AAGL和ConA在淋巴细胞膜表面的糖蛋白受体,我们分离淋巴细胞膜蛋白,与AAGL/ConA相互作用,结合的膜蛋白进行质谱鉴定;对这些蛋白进行GO功能注释分析以及高特异性结合蛋白进行PANTHER pathway分析,发现AAGL与ConA结合的膜蛋白有差异,具体的分子机制需要进一步验证。AAGL膜受体的鉴定,为进一步研究AAGL诱导的AIH-like机理奠定基础。