【摘 要】
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CIII-1菌株是本实验室从海陆两栖的红树植物-木榄叶片内分离得到的一株对多种动植物病原细菌和真菌均具有较强拮抗作用的海洋细菌,并已证明其分泌产生的胞外抗菌蛋白是菌株可
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CIII-1菌株是本实验室从海陆两栖的红树植物-木榄叶片内分离得到的一株对多种动植物病原细菌和真菌均具有较强拮抗作用的海洋细菌,并已证明其分泌产生的胞外抗菌蛋白是菌株可拮抗多种病原菌的主要活性物质(张兴锋,2007)。本文在此基础上对该菌株胞外抗菌蛋白防治香蕉和辣椒采后炭疽病的作用及其机制以及菌株分泌产生抗菌蛋白的最佳发酵培养条件等进行了研究。
用CIII-1抗菌蛋白粗提液喷雾接种后立即接种香蕉和辣椒炭疽病菌的防病作用测定结果表明:在室温(28℃)条件下,抗菌蛋白处理8d后对香蕉炭疽病的防治效果达71.44%,10d后防效仍为56.67%:9d对辣椒炭疽病的防治效果达81.82%,13d防效为52.00%。可见,CIII-1菌株胞外抗菌蛋白对香蕉和辣椒采后炭疽病具有良好的防病效果。防病机制测定结果表明:(1)CIII-1抗菌蛋白对香蕉炭疽病菌的菌丝生长及分生孢子萌发等具有极强的抑制作用,处理后的病菌菌丝出现肿胀、膨大、成泡囊状畸形,分生孢子难于萌发。(2)抗菌蛋白处理香蕉和辣椒果后,与对照比,抗菌蛋白处理的香蕉和辣椒果中的可溶性蛋白含量增加,而丙二醛(MDA)的产生量下降,同时过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)及苯丙氨酸解氨酶(PAL)等活性也均有不同程度的变化。因此,本研究认为,抗菌蛋白对病菌抑制作用以及接种后诱导果内可溶性蛋白含量增加、防御性酶(如POD、SOD、PPO、PAL等)活性反应和减少果内活性氧及丙二醛等物质的产生等,是该抗菌蛋白防病的主要机制。
关于CIII-1菌株产生抗菌物质发酵培养条件,本研究用单因素、双水平分析和响应面法对其发酵条件进行了优化。单因素测定发现,以pH为8.0时的9号(PSB)培养基,装液量为50ml/250ml,接种4%、种龄为18h的种子液,培养96h时,菌株培养上清液的抑菌圈最大,即产生的抗菌物质最多;双水平筛选影响因子结果表明,装液量对菌株抗菌物质产生的影响最大,接种量和pH值次之,种龄与培养时间影响最小;响应面法实验得到理论上菌株产生抗菌物质的最佳装液量、接种量和pH值的最优组合分别为54.6089ml/250ml、3.9552%和pH7.9826,其抑菌活性理论值可以达到2.1500cm,根据上述理论值,实际采用装液量55ml/250ml、接种量4%、pH8.0组合,其实际抑菌活性达到了2.15cm,较好地实现了目标值。
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