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目的:1.应用组织芯片研究BTF3在结直肠癌及癌旁组织标本中的表达水平,确定BTF3与结直肠癌临床特征相关性,并对BTF3表达高低与生存预后的关系进行分析。2.研究BTF3对结肠癌细胞株HCT116细胞增殖、凋亡及克隆的影响,探讨BTF3在结肠癌细胞中发生发展的关系,为结直肠癌治疗提供新的靶标,为判断结直肠癌预后提供新思路。方法:第一部分:对基因芯片包含的结直肠癌及结直肠癌旁临床组织标本,采用免疫组化染色技术检测BTF3在90例结直肠癌组织及其相配对的结直肠癌旁正常组织中的蛋白表达水平。分析BTF3在结直肠癌组织及癌旁组织中的差异表达情况,并对BTF3的表达与结直肠癌患者生存预后及临床病理因素进行分析。第二部分:1.慢病毒转染构建BTF3沉默的结直肠癌细胞HCT116,应用qRT-PCR方法验证转染后BTF3的mRNA表达水平。2.实验设计为三组即Control组,LV-BTF3-siRNA组,LV-negative-siRNA组。3.各组结直肠癌细胞株HCT116的增殖情况用MTT法检测,细胞的凋亡和周期检测运用流式细胞技术进行分析。4.平板克隆形成实验检测BTF3沉默的结直肠癌细胞株HCT116中细胞的克隆形成能力。结果:1.免疫组化染色结果显示BTF3定位于结肠上皮细胞的细胞核及细胞质中,其在结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织中BTF3相对免疫反应性评分为2.61±0.07(来自免疫反应强度测量),结直肠癌旁组织(Adjacent noncancerous tissues,ANCT)样品中BTF3的相对免疫反应性评分为1.90±0.03(来自免疫反应强度测量),两组数据采用独立样本t检验(P<0.01)。由此推断,BTF3在结直肠癌组织中较癌旁正常组织表达上调。2.BTF3在结直肠癌中的表达上调与结直肠的TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。而与性别、年龄、病理分级无显著性差异(P>0.05)。3.对结直肠癌中BTF3的过表达与结直肠癌预后采用Kaplan-Meier生存曲线进行分析,Log-Rank检验统计学有意义(p=0.003),表明BTF3的异常表达与Kaplan-Meier生存率分析的不良预后有关,但是在ANCT组织中BTF3过表达组和BTF3表达下调组之间的无复发存活率没有显着差异。4.根据BTF3的靶序列设计了3组siRNA,其中siRNA-1和siRNA-2对BTF3的敲减效率与对照组相比有统计学意义(P<0.01),但siRNA-1比siRNA-2效果更佳。应用慢病毒转染技术将BTF3转染至结直肠癌细胞HCT116中,qRT-PCR结果显示,与空载体转染相比,BTF3沉默组的HCT116细胞中,BTF3的mRNA水平均有显著的下降(P<0.01)。5.MTT法结果表明,BTF3沉默后的HCT116细胞较空载体转染组相比,具有活性的细胞的数量显著减少(P<0.01),细胞生长显著减慢,这提示BTF3的表达可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖;经BTF3转染后的HCT116细胞与空载体转染组相比,其凋亡率发生显著的下降(P<0.05)。敲除BTF3可以抑制结直肠癌细胞系HCT116增殖,同时促进细胞早期凋亡,流式细胞技术分析显示BTF3敲除期间出现G2/M细胞周期停滞,从而诱导细胞早期凋亡。6.平板克隆形成实验结果表明,使用siRNA干扰技术敲除BTF3可以抑制结直肠癌细胞系HCT116中细胞的克隆形成。结论:BTF3在结直肠癌组织中有过度表达现象,其表达与TNM分期、肿瘤淋巴结转移相关,而与病理分级及患者性别、年龄无关。BTF3是结直肠癌患者预后的独立影响因素,其高表达与结直肠癌患者的不良预后有密切关联,对结直肠癌发生发展的分子机制研究具有参考价值,并有可能成为结直肠癌治疗的导向靶标。