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研究背景:前列腺癌(Prostate cancer,PCa)在欧美许多国家是男性最常见的恶性肿瘤之一,占男性癌症死因的第二位。前列腺癌的发病率在全球分布不平衡,我们国家的发病率虽低于西方国家,但近年来随着人口老龄化、生活方式的改变等诸多原因,发病率呈明显上升趋势。MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,已有大量研究表明,miRNA通过参与转录后基因表达调控影响肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力。上皮间充质转化(EMT),是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间充质表型细胞的生物学过程,包括细胞粘附分子表达减少、细胞角蛋白细胞骨架转化为波形蛋白为主的细胞骨架、细胞失去极性并获得较高的迁移侵袭抗凋亡等能力,伴随着细胞形态的改变。已有大量研究表明,microRNA通过多种机制调节EMT进程从而影响前列腺癌侵袭、转移及药物抵抗等能力。异常表达的microRNA有望成为未来治疗前列腺肿瘤转移复发,逆转前列腺癌药物抵抗作用的有效靶点。目的:通过调节前列腺癌细胞PC3、DU145及其耐药细胞PC3-TXR、DU145-TXR中异常表达的micro RNA,检测microRNA是否通过EMT改变前列腺癌细胞增殖、迁移等肿瘤学特征,以及其对紫杉醇类药物抵抗作用的影响。方法:1.应用实时荧光定量RT-PCR检测前列腺癌亲本及耐药细胞中miRNA-429的表达,确定其在两种细胞中的表达差异。2.使用miRNA mimic和miRNA inhibitor瞬时转染,上调或抑制前列腺癌细胞中microRNA的表达,并用RT-PCR验证其表达的改变。3.通过Western blot检测前列腺癌细胞中microRNA表达改变前后EMT相关基因的表达水平4.应用MTS法及细胞划痕实验测定microRNA转染前后前列腺癌细胞增殖和迁移能力的改变。5.利用MTS法检测microRNA转染前后前列腺癌耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变。结果:RT-PCR结果显示,前列腺癌亲本细胞和耐药细胞中miRNA-429表达存在明显差异,提示亲本及耐药细胞间特征差异可能与miRNA-429的表达有关。应用miRNA mimic和miRNA inhibitor瞬时转染,上调耐药细胞并抑制亲本细胞中miRNA-429的表达。Western blot结果表明在耐药细胞株中低表达的上皮细胞相关靶点E-cadherin经mimic瞬时转染后其表达明显升高,而原本高表达的间充质细胞相关靶点vimentin的表达下降。相对应的,在前列腺癌亲本细胞中瞬时转染inhibitor抑制miRNA-429的表达后,原本高表达的E-cadherin表达下降,vimentin表达上调。MiRNA mimic和miRNA inhibitor转染后的MTS结果显示,miRNA-429表达影响前列腺癌细胞增殖能力。划痕实验表明,miRNA-429表达提高后前列腺耐药细胞的迁移能力下降。MiRNA-429 mimic转染后紫杉醇处理组与阴性对照紫杉醇处理组相比,前者的抑制作用更加明显,表明前列腺耐药细胞中miRNA-429的表达上调使其对紫杉醇敏感性增加。综上所述,miRNA-429有望成为前列腺癌治疗以及缓解药物抵抗作用的新靶点。结论:通过上调microRNA-429的表达可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移能力,并且miRNA-429表达的升高还可以增加前列腺耐药细胞对紫杉醇的敏感性。