【摘 要】
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CDKN2A基因在许多恶性肿瘤中频繁发生失活，尤其与肺癌的发生发展有密切的关系，由于存在内含子的剪接机制，CDKN2A基因能够产生3个转录变异体，分别为p16；p14ARF和p12。p16和p14ARF是
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CDKN2A基因在许多恶性肿瘤中频繁发生失活，尤其与肺癌的发生发展有密切的关系，由于存在内含子的剪接机制，CDKN2A基因能够产生3个转录变异体，分别为p16；p14ARF和p12。p16和p14ARF是重要的细胞周期调控因子，分别参与p16-cyclin D1-CDK4/6-pRb-E2F和P14ARF-MDM2-P53细胞周期调节通路，但是它们抑制肺癌细胞增殖的作用有何区别还不清楚。本实验分别构建pCDNA3-p16，pCDNA3-p14ARF，pCDNA3-p12真核表达载体，选取具有代表性的INK4A/ARF基因座缺失的肺腺癌细胞系A549，进行稳定转染，用G418作为药物筛选标记，转染后应用细胞生长曲线和流式细胞仪技术比较P16、P14ARF、P12对细胞生长的影响，结果成功构建pCDNA3-p16，pCDNA3-p14ARF，pCDNA3-p12真核表达质粒，并且测序得到验证。在A549细胞系中进行了质粒的稳定转染，利用免疫细胞化学技术证实转染后产生了P16、P14ARF、P12蛋白。通过生长曲线发现P16、P14ARF、P12蛋白都明显抑制肿瘤细胞的生长；同时发现P16蛋白使细胞周期发生了明显的G<,1>→S期的阻滞，而P14ARF蛋白也使细胞周期产生了显著的G<,1>期的阻滞，但是P12蛋白没有产生G<,1>→S期的阻滞。本实验得出结论：在肺腺癌细胞系A549中，CDKN2A基因的转录变异体P16抑制细胞生长的能力较强。
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