【摘 要】
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目的:分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗及免疫学研究。方法:分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗
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目的:分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗及免疫学研究。方法:分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建非分泌型重组质粒pMEg95。再将BCG-Ag85B信号肽序列定向克隆至pMEg95,构建分泌型重组质粒pSMEg95。电穿孔法将两型重组质粒分别导入BCG菌及耻垢分枝杆菌。分别用两型重组疫苗免疫小鼠,于第五周和第八周用ELISA法检测体液免疫指标。结果:双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因Eg95序列和Ag85B信号肽序列正确插入载体pMV261,细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗构建成功。SM型酶免分析仪检测第五周和第八周的IgG1和IgG2a显示,分泌型重组疫苗较非分泌型重组疫苗抗体效价高;重组BCG较重组M.s的抗体效价高。结论:构建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信号肽序列的细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型BCG-Eg95和M.s-Eg95分枝杆菌疫苗。比较两型重组疫苗免疫小鼠后体液免疫水平,重组BCG-Eg95和M.s-Eg95疫苗可在BCG和M.s中表达Eg95抗原蛋白;分泌型重组疫苗较非分泌型重组疫苗免疫效果强;作为疫苗载体,BCG较M.s具有更好的免疫效果。
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