蝇蛆的培养及其蛋白提取工艺与抗菌活性的研究

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本文以蝇蛆为研究对象,探讨了影响蝇蛆生长及其体蛋白质含量的培养条件,并对影响蝇蛆蛋白得率及抗菌活性的制备工艺进行了研究。主要结果如下:1.不同培养条件对蝇蛆生长及其体蛋白质含量的影响以麦麸为饲粮,通过加水调制成不同的含水量;以麦麸干基为基础,在育蛆料中投入1日龄幼蛆来设置不同的蝇蛆饲养密度;通过添加不同剂量的枯草芽孢杆菌来发酵麦麸;通过添加不同剂量的全脂奶粉来提高麦麸中的蛋白水平,培养并收集4日龄蝇蛆。结果表明,75%―80%含水量的麦麸有利于蝇蛆的生长,75%组的蝇蛆体蛋白质含量显著高于80%组(P<0.05),且干物质得率和料重比没有显著差异。饲养密度为12头/g―20头/g麦麸,蝇蛆生长发育迅速,各组之间的体蛋白质含量没有显著差异(P>0.05),但20头/g的料重比明显低于12头/g和16头/g麦麸。经枯草芽孢杆菌发酵后的麦麸能明显促进蝇蛆生长,0.3%组的蝇蛆体蛋白质含量和料重比明显优于0.6%组,且干物质得率相差只有0.53%。麦麸中奶粉添加量为3%时,蝇蛆体蛋白质含量最高,且料重比低于对照组和2%组(P>0.05),略高于1%和4%组。因此,本试验条件下最佳的蝇蛆培养条件为:麦麸含水量为75%,蝇蛆饲养密度为20头/g麦麸,枯草芽孢杆菌的添加量为0.3%,全脂奶粉的添加量为3%。2.蝇蛆蛋白分离纯化及其提取工艺的研究在本研究中最佳的蝇蛆培养条件下培养蝇蛆,经组织匀浆法提取,80℃水浴处理,Sephadex G50层析,透析、旋转蒸发和冷冻干燥法浓缩,抑菌圈法,SDS-PAGE电泳等技术对蝇蛆蛋白进行分离纯化并鉴定其具有抗菌活性的组分。结果表明,3种浓缩方法对蝇蛆蛋白的抗菌活性影响较小,其中冷冻干燥法效果最好;蝇蛆蛋白具有抗菌活性的主要成分分子量在4.08kD―10.45kD之间。采用喷雾干燥法制备蝇蛆蛋白,通过检测其得率及抗菌活性,优化出了在4℃环境下的最佳提取工艺条件:液固比为4:1,浸提时间为0,提取液为PBS缓冲溶液。3.蝇蛆蛋白诱导及其喷雾干燥工艺的研究以猪源大肠杆菌K88为诱导源培养蝇蛆,经组织匀浆法提取、考马斯亮蓝法、抑菌圈法、Sephadex G50、SDS-PAGE电泳检测蝇蛆蛋白的诱导表达差异。结果表明,实验组蝇蛆粗提液总蛋白浓度高于对照组(P>0.05),抑菌圈直径显著高于对照组(P<0.05),其中低剂量的大肠杆菌对蝇蛆蛋白的诱导效果最好。以大肠杆菌K88诱导后的蝇蛆为材料,通过测定蝇蛆蛋白得率及抗菌活性优化出了最佳的喷雾干燥工艺参数:进风温度为140℃,进料速度为4r/min。本研究,喷雾干燥法制备出的蝇蛆蛋白产品对革兰氏阳性菌的敏感性强于对革兰氏阴性菌。
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