十字花科根肿病菌Plasmodiophora brassicae生防菌的筛选及其诱变选育

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由芸苔根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起十字花科根肿病是一种世界性病害。该病主要危害十字花科蔬菜,危害植株根部,严重时引起根部腐烂乃至全株枯死。目前,国内外对根肿病尚无有效的防治方法。化学药剂的防效不稳定且易产生抗药性、污染环境。虽然可利用抗病育种进行防治,但大部分的十字花科蔬菜和油料作物尚无抗病品种。本试验以获得能有效防治十字花科根肿病的生防菌为目的,从十字花科植物的根际土和根、茎、叶中分离生防菌,通过测定其对根肿病菌休眠孢子萌发率的抑制作用筛选出2株生防放线菌。对这2株生防放线菌进行了鉴定以及诱变育种,通过紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变以及复合诱变成功获得2株生防作用更好的突变菌株。采用室内盆栽防效试验和田间防效试验评价了这2株生防放线菌和突变菌株对十字花科根肿病的防效。本试验的主要结果如下:1.生防菌的分离与筛选试验从十字花科植物的根际土以及植株体内共分离得到152株细菌、110株放线菌、63株真菌。通过测定其对抑制根肿菌休眠孢子萌发率来进行初筛,筛选出9株生防菌。采用室内盆栽防效试验进行复筛,最终筛选出2株生防放线菌F-22和F-24,其室内防效分别为52.78%、55.37%。2.生防放线菌F-22和F-24的鉴定本试验采用传统分类与分子分类相结合的方法对生防放线菌F-22和F-24进行了鉴定。通过构建发育树和16S rDNA同源性分析未找到与F-22和F-24菌株同源性极高的序列,但鉴于其形态与培养特征、生理生化特性等将F-22菌株归为链霉菌的烬灰类群(Streptomyces sp.),将F-24菌株归为链霉菌的球孢类群(Streptomyces sp.)。F-22菌株在GenBank的序列登录号分别为JQ863115、F-24菌株为JQ863116。3.生防放线菌F-22和F-24的诱变育种采用紫外线诱变、硫酸二乙酯(DES)诱变以及DES和紫外线的复合诱变3种诱变方法对F-22和F-24菌株进行诱变选育。对这3种诱变方法进行了诱变效应评价,紫外线是F-22和F-22菌株的最佳诱变剂。对获得的突变菌株进行了筛选,得到了2株抑制孢子萌发率最高的突变菌株F-22-29和F-24-8,分别达到了85.64%、82.34%,与出发菌株相比分别提高了51.74%、29.71%。经过传代试验,连续传代10后,突变菌株F-22-29和F-24-8的抑制孢子萌发率无明显变化,其遗传稳定性良好。4.生防放线菌F-22和F-24及其突变菌株的田间防效试验结果表明:生防放线菌F-22和F-22菌株的田间防效分别为46.39%、48.14%,突变菌株F-22-29和F-24-8的田间防效分别为59.99%、58.93%,突变菌株的田间防效高于已上市的化学药剂和生物农药。试验证明,突变菌株F-22-29和F-24-8具有较高的开发潜力。
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