脂质体包裹猪血红蛋白技术优化及异源输血的研究

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脂质体包裹血红蛋白(LEH)是参照红细胞结构,将血红蛋白包裹进磷脂材料中而形成的一种微囊小颗粒。它具备红细胞部分功能,由于外膜不存在糖蛋白,LEH的使用不会受到血型的限制。如今,无论在人类医疗还是动物医疗中,血液制品是紧缺的。而且输血还存在诸多的弊端如疾病的交叉感染,输血溶血反应等。LEH有望克服人类和动物的用血障碍。本研究的主要内容分为4个部分:优化制备LEH的方法,探索最佳保存条件,LEH体内外安全性检测,LEH复苏急性失血性休克动物模型。(1)逐一探索旋转蒸发法中各个条件对LEH包封率的影响,最高包封率的因素作为选定目标。当血红蛋白浓度(CHB=140 g/l)、m(卵磷脂):m(胆固醇)=2:1、V(氯仿):V(乙醚)=3:1、V(油相):V(水相)=3:1、旋转速率=100 r/min、水浴温度=25℃时,LEH取得最大包封率(47.35±2.05)%。(2)分别测得和观察LEH于30d内在不同保存液中,不同的温度下的泄露率和其颜色的变化。结果表明:在4℃下,LEH在0.9%NaCl液中的泄露率最低(18.78%),LEH颗粒依旧为红色,具有携带氧气能力。(3)LEH在普通肉汤培养基中无细菌长出,在与兔血的配血试验中无凝血、溶血反应。将LEH输入健康兔子体内,生理特征短时间内皆可恢复正常,说明其能安全使用于兔。但血常规,尿常规,生化指标的上升表明LEH对机体的免疫系统、肝脏、肾脏会产生一定的影响。(4)为探讨异源LEH复苏急性失血性休克猫的临床效果,分别用RBC、LEH、生理盐水进行复苏。观察比较3组治疗前后的血氧饱和度,血常规,生化指标。试验结果表明:复苏3 h后,异源LEH能达到近似RBC的效果可以修正急性失血性休克猫的氧气亏损和减少低灌注引起的多器官损伤,优于使用生理盐水。本研究对LEH的制备、保存、安全性、功能性进行了探讨,为LEH能成为动物通用红细胞应用于兽医临床打下了一定的基础。
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