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乳腺癌是影响女性健康最常见的恶性肿瘤之一，占女性癌症死亡率的首位。现已普遍认为其发生与乳腺导管上皮非典型增生关系密切。近年来，促分裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activatedprotein kinase，MAPK）级联途径异常与肿瘤发生发展关系受到了生物工作者的广泛重视。MAPK级联途径，具有信号汇总功能，在信号转导过程中起着重要作用。 细胞外信号调节激酶（Extracellular signal-regulated kinase，ERK），是最早发现的MAPK亚类，是一种保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，广泛表达于多种人类细胞。多种生长因子、激素、神经递质与相应受体结合后，均能通过细胞内信号分子的逐级传递作用，使其磷酸化激活，从而参与细胞生长、发育、分裂及细胞间功能同步等生理过程，并在细胞恶性转化的病理过程中起作用。p-ERK（phospho-ERK），即磷酸化细胞外信号调节激酶，是ERK的活性形式，可转入细胞核，通过磷酸化活化转录因子而调控特定基因的表达。许多细胞培养模型研究表明：ERK／MAPK途径的活化足以使NIH3T3细胞发生转化和PC12细胞分化，而且MAPK激活是肿瘤形成所必需的。但是直到1997年Sivaraman等才发现ERK／MAPK促进了人类肿瘤恶性表型的转化，其后在其它上皮来源的肿瘤组织中有关ERK／MAPK的研究报道亦有逐渐增多的趋势。 本实验我们检测ERK2／p-ERK在乳腺增生和癌组织中的表达情况，旨在探讨ERK／MAPK在乳腺导管上皮细胞癌变过程中的作用。这里我们应用了特异识别p-ERK的磷酸化抗体检测有活性的ERK／MAPK的表达，并观察其在乳腺各种病变组织中的定位。目前，有关其在人类肿瘤组织中的研究报道甚少，而且在乳腺癌方面尚未见研究报道。 材料与方法 标本：乳腺组织蜡块67例取自中国医科大学附属第一临床医 院、附属第二临床医院病理科。均为女性，年龄21－73岁。依据 中华病理学杂志编辑委员会所推荐的乳腺增生症及乳腺癌组织学 分类标准进行。 方法：免疫组织化学S－P法。抗原修复：复合酶pD0022，武 汉博士德生物工程有限公司赔7 T孵育 25分钟；兔抗人 ERK。多 克隆抗体＊C－154，北京中山生物技术有限公司)以八 100稀释度 37℃孵育二小时；鼠抗人p－ERK单克隆抗体（SC－7383，d京中 山生物技术有限公司）以乙 200稀释度 37 t孵育 1．5小时；DAB 显色（DAB－0030，福州迈新生物技术开发公司人用吸管吸去血 清，其余各步之间用PBShH＝7．4）冲洗三次，每次5分钟。PBS 代替一抗作阴性对照。余均按标准操作步骤进行。 结果判断：ERK。蛋白阳性表达于细胞浆，按着色强度分级： 无着色为(一入浅黄色为(＋X棕黄色为(＋十八 p－ERK蛋白阳 性表达见于细胞核和／或细胞浆，按阳性细胞百分数分级：无着色 为（一厂阳性细胞数＜10％为（十太阳性细胞数）10％ 为（十十）。 统计学分析：采用SPSS for Windows 10．0统计分析软件，应用 X‘检验方法进行统计分析。 实验结果 二．ERK。蛋白在乳腺各组病变中的表达： 所有病例中ERKz蛋白表达见于乳腺导管上皮细胞。在导管 单纯性增生组织中 ERK。蛋白呈弱表达K2．5％，5／8）或阴性表 达；35例导管非典型增生组织中26例ERK。蛋白表达阳性，百分 率为 74．3％。随着非典型增生程度增加，ERK。蛋白阳性率逐渐 ·2·增强，在导管轻度、中度、重度非典型增生组中ERK。分别为70．0阮、75．0呢、76．9啪。24例要腺癌组织中22例呈阳性表达，百分率为91．6％。导管内癌组和浸润性导管癌组阳性率分别为90．9％和92．3％。经统计学分析，乳腺癌组与乳腺单纯性增生组有显著差异口＜O．05人 2．p－ERK蛋白在乳腺各组病变中的表达： 所有病例中P－ERK蛋白表达见于导管上皮细胞，以核表达为主；少数病例可见明显的浆表达，伴或不伴核表达。在乳腺导管单纯性增生组中未见P－ERK蛋白表达。35例乳腺导管非典型增生组织中9例P－ERK蛋白表达阳性，百分率为25．7％。在导管轻度、中度、重度非典型增生组中阳性率分别为10．0％。16．7％／6．2％，均未见强阳性表达。24例乳腺癌组织中20例呈阳性表达，百分率为83．8％。导管内癌组和浸润性导管癌组阳性率分别为sl．8％和84．6％。经统计学分析，与单纯性增生组相比，乳腺重度非典型增生组与乳腺癌组均有显著差异u＜队05人 讨 论 ERK途径为MAPK级联途径通路的原型，其信号传递模式可以简单概括为：生长因对激素一受体十R二S—R af－af－ MEK／MEKz—ERK；／ERK加目前研究发现多种肽类生长因子，其相应的受体，RasPaf在乳腺癌组织中表达增高，因而可推测乳腺癌组织中ERK蛋白表达增高。 本实验ER民染色结果表明：ERK。蛋白在乳腺癌组织中的表达高于乳腺单纯性增生组织。这与 1997年 Sivaraman?