紫杉醇联合Lewis y单克隆抗体对人子宫内膜癌的抑制作用的研究

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目的:子宫内膜癌是原发于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤,近年来,国内外报道其发病率均有增高趋势。虽然随着新的化疗药物应用,手术,化疗,放射治疗技术方案的逐步改进,妇科肿瘤的治疗效果有了明显的改善,但是对于晚期肿瘤患者的治疗仍然是妇科肿瘤医师面临的问题,因此,探求新的治疗手段和方法日益受到重视。紫杉醇是近年来用于癌症治疗的一种天然抗肿瘤药物,单药应用对子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、头颈部癌、食管癌均有一定疗效,被认为是一种广谱抗癌药物,联合其他常用抗肿瘤药物,疗效可进一步提高,成为最有效的抗肿瘤药之一。Lewis y(LeY)寡糖抗原是一种肿瘤相关抗原,高表达于多种腺上皮来源的恶性肿瘤组织中,有研究表明,在子宫内膜癌,子宫内膜过度增生及子宫内膜异位组织中LeY抗原表达几乎达100%,而正常子宫内膜组织中几乎没有表达。本实验采用高表达LeY抗原的人子宫内膜移行上皮癌细胞株A431,初步研究紫杉醇联合LeY单克隆抗体对A431细胞的体外抑制作用及其作用机制。方法:实验采用人子宫内膜癌移行上皮癌细胞株A431进行体外培养,实验分为4组:对照组(加入等量培养基),紫杉醇组(10nm),抗体组(1:200),联合处理组(紫杉醇10nm和LeY克隆抗体1:200),分别进行如下实验:(1)用倒置显微镜对药物处理后第四天的细胞进行形态学观察;(2)MTT法检测药物对细胞的增殖的影响;分析药物对细胞增殖的抑制率;(3)用Lectine-blot方法检测Lewis y的表达;(4)用RT-PCR检测PCNA和FUT4的表达。(5)用Western Blot的方法检测PCNA和FUT4的表达。结果:(1)倒置显微镜观察细胞的形态学变化:对照组A431细胞贴壁良好,形态饱满,呈不规则多边形;紫杉醇处理组则细胞变椭圆,细胞密集;LeY单克隆抗体处理组可见部分细胞凋亡,细胞萎缩;联合用药组则大量细胞死亡,可见部分细胞碎片;(2) MTT实验结果显示:紫杉醇组和LeY单克隆抗体组均对A431细胞有增殖抑制作用,以联合用药组效果最显著且呈协同作用(P<0.05);此外,与对照组相比,各实验组的细胞增殖率均减小,呈时间剂量依赖性,联合用药组的细胞增殖抑制率要明显小于其他三组(p<0.05);(3)Lectine-blot方法检测Lewis y的表达,结果显示:与对照组相比,紫杉醇组合LeY单克隆抗体组Lewis y的表达均呈下降趋势,且以二者联合用药组下降幅度最为显著(P<0.05);(4)RT-PCR检测FUT4,PCNA基因的表达,结果显示:与对照相比,紫杉醇组和LeY单克隆抗体组FUT4,PCNA基因的表达均呈下降趋势,且以二者联合用药组下降的幅度最为显著(p<0.05);(5)Western Blot方法检测PCNA和FUT4的表达,结果显示:与对照组相比,紫杉醇组和leY单克隆抗体组PCNA和FUT4的表达均呈下降趋势,且以联合用药组下降幅度最为显著(p<0.05)。结论:紫杉醇和LeY单克隆抗体均能抑制A431细胞的增殖,二者联合用药则可增强其抑制效果,其机制可能是通过下调FUT4的表达,进而抑制LeY的合成,从而达到抑制肿瘤细胞生长增殖的目的。
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