背景肺癌是目前世界范围内癌症导致死亡原因之首,虽然目前有手术、放疗、化疗及靶向治疗等多种治疗方法,但总体5年生存率仍很低。肺癌发病是一个涉及多基因的多阶段的复杂过程,遗传学和表观遗传学改变在其过程中发挥了重要作用。表观遗传学是指在细胞分裂过程中,不改变相关基因的DNA序列而影响相关基因表达变化的科学。启动子区域CpG岛甲基化引起抑癌基因表达的下调或缺失是一种重要的表观遗传学调控机制,许多研究表明,这种改变在多种人类恶性肿瘤疾病中发挥了重要作用。SOX17是SOX转录因子超家族的成员之一,通过5’-(A/T)(A/T)CAA(A/T)G-3’与靶基因序列结合,在胚胎发育和造血干细胞的维持方面发挥作用。近年多个研究发现,SOX17通过抑制经典的Wnt信号通路,影响了结肠癌、肝癌、乳腺癌等种人类恶性肿瘤的发生和发展,并被认为是候选的抑癌基因。SOX17在肺癌中的表观遗传学变化及与肺癌发生关系目前尚无报道,能否成为肺癌的候选抑癌基因尚不清楚。目的1.检测SOX17在肺癌细胞系中的表达及甲基化改变。2.检测SOX17在肺癌和癌旁组织中的表达及甲基化改变,分析临床病理联系。3.研究SOX17在肺癌细胞中的功能及探讨可能的机制。方法1. RT-PCR和Westernblot检测细胞系中SOX17在甲基转移酶抑制剂5-aza-dc处理前后(?)nRNA及蛋白水平的表达情况。2.甲基化特异性PCR(methylationspecificPCR, MSP)检测细胞系和组织标本DNA中SOX17甲基化情况。3.免疫组织化学方法检测SOX17在肺癌及相应癌旁组织中的表达。4.脂质体法转染SOX17真核表达载体,G418筛选瞬时转染SOX17的细胞。5.克隆形成实验分析SOX17对肺癌细胞增殖的影响结果1.SOX17在肺癌细胞系中的表达及甲基化改变本课题选用4株肺癌细胞系：H23、A549、H446和95D。在mRNA水平,SOX17在H23中无表达,在A549中为弱表达,在H446及95D中表达正常；MSP检测结果显示H23中SOX17为完全甲基化,A549、H446和95D为部分甲基化。5-Aza-dC处理96小时后,H23恢复表达,A549表达上调,而H446和95D表达无明显改变。选取H23及A549两株细胞在蛋白水平检测SOX17的表达,结果显示与mRNA水平改变一致。说明SOX17在肺癌细胞中基因表达水平受到启动子区甲基化的调控。2.SOX17在肺癌组织中的表达及甲基化改变83例肺癌组织标本中,53例发生甲基化(63.9%),而31例癌旁标本中仅5例发生甲基化(16.1%),癌及癌旁标本甲基化率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。29对癌及癌旁的组织标本免疫组化染色结果提示,SOX17在25例癌组织中表达阴性,其中22例发生了启动子区甲基化,而4例表达阳性的肺癌组织中,仅1例为甲基化,差异有统计学意义。说明甲基化是调控SOX17表达的重要机制。SOX17甲基化与性别及肿瘤分化程度相关,与肿瘤类型、分期等无关。3.恢复SOX17表达对肺癌细胞增殖的影响克隆形成实验提示在H23细胞中恢复了SOX17表达后,细胞克隆数量明显减少,与对照组(空载体转染组)相比差异有统计学意义。提示SOX17对肺癌细胞增殖有抑制作用。结论SOX17启动子区甲基化是肺癌发生过程中的好发事件,并且是SOX17基因表达下调的重要机制；SOX17甲基化与肺癌患者性别及肿瘤分化程度相关；SOX17具有抑制肺癌细胞增殖的作用,可能作为肺癌的候选的抑癌基因。