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癌症是一种严重威胁人类健康的致命性疾病,因此迫切需要找到有效的治疗药物和方法。中药治疗由于具有各种优势,因此可能为癌症治疗开辟一条新的途径。天然植物抗菌液(PAMs)是云南民族医药研究所有限公司从红花、紫草、刺天茄、芸香草等多种传统中草药中提取制备的复方产品。前期研究发现,PAMs对肝癌、乳腺癌等所有检测的十多种肿瘤细胞株均具有很强的体外杀伤作用,显示了其作为现代中药产品研发在抗癌领域的潜在巨大前景与优势。但作为多种植物源复方产品,其功效成分复杂、抗癌作用机理尚不清楚。在本论文中,我们以人白血病和小鼠黑色素瘤为研究对象,分析PAMs在癌症治疗的作用及其初步机理。首先,以造血系统恶性肿瘤-白血病为研究对象,初步研究和揭示PAMs对白血病K562细胞的杀伤作用及抗癌分子作用机理。MTT法确定PAMs对K562细胞的增殖抑制作用和具有的浓度和时间依赖性;AO-EB双染、Annexin-FITC/PI流式细胞仪染色观察显示PAMs对K562细胞的杀伤作用与细胞凋亡相关,这也被进一步的分子水平与酶活力检测所证实:FQ-PCR基因表达检测发现,PAMs处理后,K562细胞株中caspase-3、caspase-9、bax等促凋亡相关基因有所上升,而抑制凋亡基因bcl-2表达下降,Western blotting法检测到PAMs上调Caspase-3的表达量,同时下调抑制凋亡蛋白Survivin的表达。这也与Caspase酶活性测定结果相一致,PAMs处理后的K562,其Caspase-3、-9活性均有所上升。所有这些结果一方面揭示PAMs对白血病K562细胞株具有强的杀伤作用,同时在形态和分子水平揭示其抗癌抑制作用途径与诱导细胞凋亡的密切相关性。接着,我们开展了 PAMs抗小鼠黑色素瘤B16细胞的相关工作,研究表明PAMs处理B16细胞后,随着浓度和作用时间的增加,细胞抑制率也随着增加。AO/EB双染以及Annexin-FITC/PI染色表明,PAMs对细胞的杀伤作用包括诱导细胞凋亡,同时也包括非凋亡途径。细胞划痕和Transwell小室实验证明PAMs可以有效地抑制细胞迁移。体内实验部分,我们建立了 C57/BL小鼠移植B16细胞模型,用PAMs进行治疗,同时设置了阳性对照CTX组。实验三周后,处死小鼠,取小鼠肿瘤组织、胸腺和脾脏称重并计算抑瘤率,胸腺指数和脾指数,HE染色观察,并且取小鼠血清检测PAMs作用后血清内VEGF和IL-12的变化。结果表明,与对照组相比,PAMs组和阳性对照组CTX抑制率分别为47.5%和77.6%,差异都极其显著(**P<0.01):与对照相比,环磷酰胺组脾指数和胸腺指数均有所下降,具有显著性差异(**P<0.01),而PAMs组小鼠与对照组相比,则无统计学差异,可见PAMs对小鼠的免疫力并未有损伤作用,与CTX相比,毒副作用较小。PAMs组,血清中VEGF的含量出现了一定程度的下降,与空白组相比具有显著性差异(**P<0.01),IL-12出现了一定程度的上升,与空白组相比差异显著(*P<0.05)。主要结论:PAMs可以抑制人白血病细胞株K562的增殖,其抑制机制可能与诱导K562细胞凋亡有关,与多种分子的表达如Caspase、bax、bcl-2、Survivin等有关;PAMs体内体外实验中均能抑制B16细胞的生长,其作用机制存在多条途径,能够通过凋亡和非凋亡途径诱导细胞死亡;同时可能通过下调VEGF和上调IL-12的含量抑制黑色素瘤血管生成,抑制癌细胞的迁移。进一步的分子作用机理尚有待进一步的研究。