论文部分内容阅读
背景和目标:乳腺癌是女性人群中高发肿瘤之一，传统的治疗方法不仅给患者带来巨大的创伤，而且癌细胞微小转移无法及时检测，因而无法对所有患者远处转移做出评估和治疗，限制患者治疗后的生存率。随着肿瘤生物治疗的研究进展，似乎为弥补传统治疗的缺陷带来了希望。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（Cytotoxic Tlymphocyte antigen，CTLA-4）作为免疫治疗的靶点之一，用抗CTLA-4抗体封闭CTLA-4信号通路，提高荷瘤机体的免疫能力，治疗黑色素瘤已经取得了重大的突破。然而，单用抗CTLA-4抗体在治疗乳腺癌的研究中，发现没有明显的效果。本实验探索了小鼠乳腺癌模型的免疫状态，首次提出并试验了联合抗CTLA-4抗体和JAK2抑制剂治疗小鼠乳腺癌。方法:首先建立小鼠皮下乳腺癌模型，同样条件下用未做任何处理的小鼠作对照，建模21天后，解剖小鼠取脾，用细胞流式术检测：CD4+、CD8+T细胞百分比，骨髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells, MDSCs）和调节性T细胞（regulatory T cells, Tregs）的百分比；取小鼠骨髓检测MDSC的百分比。继而，与前述同样条件建模，将小鼠分成5组，分别为：空白对照组、溶剂对照组、anti-CTLA-4组、JAK2抑制剂组及联合用药组。接种第3天开始用药，直到第21天。用细胞流式术对荷瘤小鼠脾和骨髓的细胞亚型进行检测，用免疫组化对肿瘤微环境中凋亡细胞和微血管密度（microvessel density，MVD）进行检测。结果：一、荷瘤小鼠免疫效应细胞减少，免疫抑制细胞百分比增高。1.正常组小鼠脾组织淋巴细胞中CD8+T细胞所占的百分比为22.49±1.07；荷瘤小鼠脾组织淋巴细胞中CD8+T细胞所占的百分比为14.74±1.86。二者相比较，荷瘤小鼠脾组织淋巴细胞中CD8+T细胞的百分比明显下降（P＜0.01）。2.正常小鼠脾组织Treg所占CD4+T细胞的百分比为13.73±1.12；荷瘤小鼠脾组织该指标为27.43±0.99。荷瘤小鼠脾细胞中CD4+T细胞中Treg的百分比明显高于正常组（P＜0.001）。3.正常组小鼠脾及骨髓非淋巴细胞的单个核细胞中MDSC所占的比例分别为11.59±3.03和19.71±2.73。荷瘤小鼠脾和骨髓在非淋巴细胞的单个核细胞中MDSC所占的比例分别为87.50±1.60和94.69±0.82。荷瘤小鼠脾和骨髓细胞中MDSC的百分比明显高于正常组小鼠脾和骨髓的含量（P＜0.001）。二、用药治疗后，荷瘤小鼠肿瘤生长情况、免疫细胞的变化及肿瘤微环境的改变。1.联合用药组的荷瘤小鼠肿瘤生长速度明显低于对照组和单独用药组（P＜0.05）。2.联合用药组的荷瘤小鼠脾组织淋巴细胞中CD8+T细胞明显增高（P＜0.05）。但是与对照组相比较，单用或联合用药后MDSC无论是在荷瘤小鼠的脾还是在骨髓的量都没有明显的变化。3.在肿瘤微环境中，与对照组相比较，单用anti-CTLA-4或JAK2抑制剂都会使肿瘤微环境中细胞凋亡增加（P＜0.001），联合用药组肿瘤微环境中细胞凋亡数目明显高于任一单独用药组（P＜0.05）。联合用药组肿瘤微环境中MVD明显低于其它组（P＜0.001），单用任何一种药物治疗后，MVD明显低于空白和溶剂对照组（P＜0.001）。结论:1.荷瘤小鼠模型中，脾淋巴细胞中的细胞毒性T淋巴细胞（CD8+T细胞）的百分比明显减低，免疫抑制细胞（MDSC，Treg）的百分比明显增高，因此小鼠乳腺癌模型机体中细胞免疫能力下降。2.联合抗CTLA-4抗体和JAK2抑制剂明显抑制肿瘤生长，且促进肿瘤微环境中肿瘤细胞凋亡，减少肿瘤微环境中微血管生成。