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随着绿色环保理念的加深,生物防治越来越受到人们的重视,利用有益微生物去防治有害微生物,以菌治菌,达到治理病害的目的,同时保护生态平衡。为了降低蓝莓溃疡病给蓝莓产业造成的损失,本研究从采自吉林省多地的34份土样中分离获得了84株放线菌,其中12株对蓝莓溃疡病菌具有拮抗作用,选取其中抑菌效果最佳的1株拮抗菌(标记为CX3)进行深入研究。采用生理生化、分子生物学分析等方法明确其生物学地位;并对该菌株的发酵条件和抑菌机理进行了系统性的研究;以期研发出不同于化学农药的绿色环保生防菌剂,为蓝莓溃疡病的生物防治奠定了坚实的基础,同时为植物病害的生物防控措施提供新的思路。本研究的实验结果如下:1.采用多重筛选法初筛后获得1株对蓝莓溃疡病菌抑制效果最佳的菌株CX3,活菌抑菌带达25.91 mm,发酵液的抑菌直径达31.73 mm。在高氏一号培养基上可以旺盛生长,28℃培养7 d开始产孢子,孢子丝不自溶,无吸水现象,28℃培养15 d后,孢子堆出现粉色,孢子竖直。该菌株喜高盐环境,即使NaCl浓度达30%生长仍然茂盛,在15-28℃均可生长,最佳生长温度为28℃,在pH5-12均可生长,最适生长pH为7。根据其生理生化特性、16SrRNA测序以及全基因组测序分析,鉴定菌株CX3为链霉菌属粉红孢类群的弗氏亚群。2.CX3的培养基营养条件经正交优化,获得了优化后的发酵培养基配方:葡萄糖60 g、花生饼粉40 g、硝酸钾4 g、碳酸钙4 g、氯化钠4 g、水1000 mL,pH7.0。摇瓶发酵的最佳发酵条件为:摇床转速150 r/min时,种子液种龄6 d、发酵时间6 d、接种量5%、初始pH7.0,发酵温度28℃。50 L发酵设备的发酵工艺:培养基参照摇瓶发酵培养基,发酵参数:发酵温度28℃,转速150 r/min,通气量3.0 L/min,pH7.0,发酵时间6 d,转入发酵罐,发酵温度28℃,转速250 r/min,通气量10.0 L/min,发酵时间6 d,pH7.0。种子罐培养基配制3 L对应的原料加入2.5 L水,发酵罐培养基配制30 L对应的原料,加入25 L水。发酵液的理化性质实验结果:发酵液耐碱不耐酸;热稳定性较好;耐贮性好;光稳定性极强,具有广阔的开发前景。3.菌株CX3发酵液的抑菌机制研究结果表明:发酵液对病原菌菌丝生长、形态有明显影响。经发酵液处理的病原菌细胞膜质过氧化严重,MDA大量积累,细胞膜透性加大,细胞内含物外漏致电导率升高,初步明确发酵液的作用位点为病原菌的细胞膜。经发酵液处理后的病原菌内部葡萄糖大量消耗,丙酮酸含量明显上升,己糖激酶、丙酮酸激酶、果糖-6-磷酸激酶活性均较对照组有不同程度升高,造成菌体内部糖酵解途径加速进行,营养物质过度消耗,最终导致菌体衰亡。综上,本研究筛选获得了1株链霉菌;完成了其发酵培养基配方的优化;明确了生防菌对蓝莓溃疡病菌的抑菌机理;该菌株的发酵液可有效防治蓝莓溃疡病的发生,开发前景广泛,为针对蓝莓溃疡病的生防菌剂研发奠定基础,从而有效减少蓝莓病害发生。