实验目的本研究模拟临床坐骨神经损伤晚来就诊患者,在坐骨神经切断后延迟不同时间窗吻合神经并早期应用睫状神经营养因子（Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF）药物,通过与对照组对比,神经吻合后饲养3d后处死动物检测脊髓Ca2+浓度;神经吻合后饲养一个月（28d,4w）后处死观察Tunel凋亡染色的脊髓前角运动神经元细胞计数、HE染色的L4-6脊髓前角运动神经元形态的改变、神经吻合口部位神经纤维镀银染色形态学观察,以探讨CNTF对坐骨神经损伤后不同时间窗吻合术后相应脊髓节段前角运动神经元的保护及促进周围神经再生的作用,为临床周围神经损伤后不同时间窗吻合术用药提供一些实验性依据,并初步探讨其可能的作用机制。实验方法192只体重200-250 g的8周龄健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组（A组n=12）;实验组:坐骨神经切断外膜端-端吻合非用药组（B组n=60）、坐骨神经切断外膜端-端吻合术后CNTF治疗组（C组n=60）、坐骨神经切断外膜端-端吻合术后生理盐水治疗组（D组n=60）,其中B、C、D组在切断坐骨神经后,按照延迟手术吻合不同时间窗又分为5个亚组:即刻、3d、7d、14d、21d,每组12只大鼠。A组不做任何处理,B、C、D三组均在坐骨神经切断后用10-0线将两断端错开缝于两侧肌肉上,待等不同时间窗满足后行坐骨神经切断外膜端-端吻合术。C组动物术中在坐骨神经离断处注射CNTF 200 ng/kg·d,术后在坐骨神经吻合处注射CNTF 100 ng/kg·d,定时定量注射1/日,总注射日4W;D组动物术毕1h后在坐骨神经离断处注射生理盐水（NS） 100 ng/kg·d,定时定量注射1/日,总注射日4W。其他组动物不予药物治疗。BCD三大组分别于吻合术后饲养3d后,五个亚组时间窗（即刻、3d、7d、14d、21d）每组随机处死6只动物,取L4-6脊髓节段做Ca²⁺浓度测定;吻合术后饲养28d（4W）后,五个亚组（即刻、3d、7d、14d、21d）每组处死6只动物,取L4-6做HE染色、、Tunel染色;取吻合口处坐骨神经行神经纵切镀银染色。实验结果1大鼠一般指标1.1大鼠术后表现BCD三组与离断术前相比,都不同程度的出现烦躁不安、食欲减退、体重减轻。在吻合术后观察期间,B组和D组几乎全部的大鼠双后肢出现肌肉萎缩、末稍水肿、自食、糜烂深达骨质等表现,而C组与B、D组相比,普遍大鼠出现进食早且多,上述症状的程度较低,出现者也能较早的恢复。三组大鼠在3w左右后双后肢的运动功能都有不同程度的恢复,其中C组恢复情况较B组和D组要好,在1-2w左右表现为能够用双后肢爬行,短时间站立等。1.2脊髓HE染色光镜下,A组前角运动神经元细胞核圆形,呈蓝色淡染,位于胞体中央,核仁明显,胞质内尼氏体明显,均匀分布。BCD三组运动神经元细胞核偏位,尼氏小体浓缩、减少,细胞数目减少,出现空泡细胞,BCD三组的延期7d亚组细胞数目有差异,延期7d亚组时C组与B、D组相比,运动神经元细胞数目较其他延期天数组（即刻、3d、14d、21d）数目最少。2大鼠饲养3d指标2.1 Ca2+浓度测定吻合神经后饲养3d后取L5为中心1cm脊髓节段使用原子吸收光谱分析仪做Ca2+浓度测定,按照Ca2+离子质量浓度（μmol/g）=测定液Ca2+离子浓度/样品烘干后的质量×稀释倍数计算公式, C组Ca2+离子质量浓度数值低于B、D组,比较各组t值均≥t0.01（10）（3.169）,差异有统计学意义。3大鼠饲养28d指标3.1脊髓TUNEL染色光镜下,脊髓前角运动神经元凋亡细胞阳性表达在细胞核, TUNEL标记的凋亡细胞特征,细胞核染色质浓聚致密的斑点状,核固缩,细胞皱缩,细胞碎裂,形成凋亡小体（apoptsis body）。A组未见阳性细胞,BCD三组的各亚组均可见阳性细胞,且C组阳性细胞数少于B、D两组;其7d亚组阳性细胞数目与其他亚组有差异（P<0.05）,且7d亚组阳性细胞数最低; B、D组的亚组组间阳性细胞数目无明显差异。3.2神经纤维染色BCD三组从神经纤维镀银染色切片可见:即刻、3d、14d、21d四个亚组有部分神经纤维通过吻合口;C组的7d亚组有较多神经纤维通过吻合口,神经纤维排列好但不如正常组整齐;B、D两组7d亚组也有较多神经纤维通过吻口,但不如C组,B、D两组间镜下没有明显区别。实验结论1.坐骨神经在不同时间窗切断吻合后均可诱导脊髓前角运动神经元的凋亡。2.大鼠坐骨神经离断吻合后,早期应用CNTF可以降低急性期脊髓组织Ca²⁺离子水平,稳定细胞内外离子平衡,从而可能起到抑制脊髓运动神经元凋亡的发生、促进周围神经轴索再生数量的作用。3.大鼠坐骨神经离断21d内不同时间窗吻合手术后应用CNTF均可以减少凋亡的发生。4.大鼠坐骨神经离断21d内不同时间窗吻合手术后应用CNTF均能够促进坐骨神经轴索的再生。