[目 的]乳腺癌的发病率不断升高,是全球女性发病率最高的恶性肿瘤。蒽环类药物,例如多柔比星(Doxorubicin/Adriamycin,ADM),是治疗乳腺癌最常用的药物之一。ADM是一种广谱抗肿瘤药,有着很强的细胞毒性,其可以通过阻断细胞中的DNA和RNA,从而促使癌细胞的凋亡。他莫昔芬(tamoxifen,TAM)是雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)阳性乳腺癌内分泌治疗的常用药物[1]。TAM是一种抗雌激素药物,可以和雌激素竞争性与ER结合,阻断雌激素的作用,达到阻止癌细胞增长的目的。在临床上,TAM普遍在患者进行化疗后使用。这会引发一个问题,化疗是否会影响到内分泌治疗的效果,同时乳腺癌内分泌治疗原发性耐药和转移复发在临床上很常见,可能伴随着分子标记物的改变,它们的改变可能与化疗有关。Akt、PI3K、ER、Her-2及Ki67在乳腺癌的分子分型以及相关信号通路中有非常重要的地位。本体外实验选择ER 陽性的MCF-7乳腺癌细胞,在多柔比星培养后,通过检测TAM对细胞的影响以及细胞中Akt、Her-2等分子标记物的变化,研究多柔比星培养后是否影响他莫昔芬的疗效,并探索其相关机制。此外,本实验选择干扰多柔比星培养后的MCF-7乳腺癌细胞中Akt的表达,通过检测以上指标会出现何种变化,以探究Akt在其中发挥的作用。[方法]1.选择MCF-7乳腺癌细胞株(ER、PR 阳性,Her-2阴性),加入多柔比星培养,以模拟临床化疗的情况。2.选择MCF-7乳腺癌细胞株,加入内分泌药物他莫昔芬培养,以模拟临床内分泌治疗的情况。3.在多柔比星培养的基础上,加入内分泌药物他莫昔芬,以模拟临床上化疗结束后继续行内分泌治疗的情况4.选择用siRNA干扰正常MCF-7乳腺癌细胞及长期加入多柔比星培养后的细胞Akt的表达。5.选择用MTT检测长期加入多柔比星培养对MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制作用以及干扰Akt后细胞的增殖能力;MTT检测在长时间加入多柔比星培养后,他莫昔芬对MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制作用。6.选择用Western blot蛋白实验正常MCF-7乳腺癌细胞株、长期加入多柔比星培养后的细胞株、正常MCF-7乳腺癌细胞株(干扰后)及长期加入多柔比星培养后的细胞株(干扰后)的Akt、PI3K、ER、Her-2及Ki67的表达发生何种变化。[结 果]1.他莫昔芬对MCF-7乳腺癌细胞有抑制作用(P=0.003);而MCF-7乳腺癌细胞在多柔比星作用后,他莫昔芬丧失了对细胞的抑制作用(P=0.902)。2.长时间多柔比星培养后的MCF-7乳腺癌细胞的增殖能力明显增强,而siRNA干扰Akt后,细胞的增殖能力下降。3.MCF-7乳腺癌细胞株经长期加入多柔比星培养后Akt的表达明显升高(P=0.031623)、PI3K的表达稍有增高(P=0.18559)、ER的表达明显升高(P=0.008615)、Her-2的表达明显增高(P=0.043352)、Ki67的表达稍有增高(P=0.057361)。4.长期加入多柔比星培养后的MCF-7乳腺癌细胞株经siRNA干扰后Akt的表达明显降低(P=0.010137)、PI3K的表达稍有下降(P=0.341892)、ER的表达明显下降(P=0.0192532)、Her-2的表达明显下降(P=0.014062)、Ki67的表达稍有下降(P=0.071237)。[结 论]1.TAM能够抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长,而在多柔比星作用后,激活信号通路,Her-2、Akt的表达增加,导致TAM的作用下降,说明在多柔比星作用后,TAM对细胞的抑制作用减弱。2.在长时间加入多柔比星培养后MCF-7乳腺癌细胞增殖能力明显加强,Akt表达明显升高;干扰Akt的表达后,MCF-7乳腺癌细胞增殖能力下降。3.在长时间加入多柔比星培养后,MCF-7乳腺癌细胞的ER的表达明显增高,在干扰Akt表达后,ER的表达明显下降。在长时间加入多柔比星培养后,MCF-7乳腺癌细胞的Her-2表达明显增高,在干扰Akt表达后,Her-2的表达明显下降。Akt这一靶点对癌细胞的生长和存活有着显著的作用,乳腺癌患者在使用化疗的同时联合针对Akt的靶向治疗可能会获益。